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熒光標(biāo)記多肽

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熒光標(biāo)記多肽
熒光修飾可以通過共價(jià)鍵的形式連接在多肽序列的N端或C端，但是更推薦在N端進(jìn)行修飾。熒光標(biāo)記肽結(jié)合成像技術(shù)后可用于識(shí)別特定靶點(diǎn)。共聚焦或熒光顯微鏡的體外成像仍然是研究細(xì)胞內(nèi)各種生物過程和相
互作用十分有效的方法之一。與蛋白質(zhì)不同，這些肽定位于肌動(dòng)蛋白上的特定靶點(diǎn)，不易聚集蛋白質(zhì)，因此非常適合于
體外跟蹤。

詳細(xì)介紹

熒光修飾可以通過共價(jià)鍵的形式連接在多肽序列的N端或C端，但是更推薦在N端進(jìn)行修飾。熒光標(biāo)記肽結(jié)合成像技術(shù)后可用于識(shí)別特定靶點(diǎn)。共聚焦或熒光顯微鏡的體外成像仍然是研究細(xì)胞內(nèi)各種生物過程和相

互作用十分有效的方法之一。與蛋白質(zhì)不同，這些肽定位于肌動(dòng)蛋白上的特定靶點(diǎn)，不易聚集蛋白質(zhì)，因此非常適合于

體外跟蹤。同樣，FITC標(biāo)記的CPP也可被用于細(xì)胞內(nèi)組分的成像，且其細(xì)胞毒性低。

其中，FITC 是一種胺活性的熒光染料，可廣泛的用于標(biāo)記多肽和蛋白質(zhì)。合生生物在N端標(biāo)記Fitc，都會(huì)建議在后面一

個(gè)氨基和由異硫氰酸酯與氨基反應(yīng)產(chǎn)生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器（alkyl spacer）如氨基己酸（Ahx）。鏈接切割

需要酸性環(huán)境，在N端標(biāo)記FITC的多肽需經(jīng)歷環(huán)化作用來(lái)形成熒光素，通常會(huì)伴有后面一個(gè)氨基酸的去除，但當(dāng)有一個(gè)

間隔器如氨基己酸，或者是通過非酸性環(huán)境將目的肽從樹脂上切下來(lái)時(shí)，這種情況可避免?？臻g位阻被認(rèn)為是在熒光染

料前使用Ahx的主要原因，而不是為什么FITC不能直接偶聯(lián)在多肽上的原因。

對(duì)于較長(zhǎng)的序列，建議使用 FRET pairs (fluorescence resonance energy transfer pairs)進(jìn)行修飾。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）是描述兩個(gè)熒光團(tuán)之間的能量轉(zhuǎn)移的機(jī)制。由于FRET效率部分基于供體和受體分子之間的

距離，因此該技術(shù)通常用于研究酶效率，蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用或其他分子動(dòng)力學(xué)。