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REAGEN™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒-齊一生物

來源:齊一生物科技(上海)有限公司   2019年05月21日 11:58  

REAGEN 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒

RND99033

1.概述

REAGEN 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒是用于腎臟、肝臟、肌肉(牛肉、雞肉和豬肉)、細(xì)胞裂解液、血、尿、牛奶中卡那霉素殘留的定量檢測。該試劑盒有以下特點(diǎn)

  • 快速(10-40分鐘),多種樣品的非有機(jī)溶劑的提取方法,高回收率(>80%)。
  • 高靈敏度(0.2ppb)。
  • 高重復(fù)性。
  • 快速的ELISA檢測方法(不考慮樣本量的前提下只需不到1小時)。

2.試劑盒原理

REAGEN 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應(yīng)原理,抗原已經(jīng)包被于微孔板上。分析時,樣品、酶標(biāo)物以及抗體加入孔中,如果樣品中含有藥物,會與微孔板上的抗原競爭抗體,同時酶標(biāo)物與抗體結(jié)合。加入TMB底物,底物的顏色顯色強(qiáng)度與樣品中毒素的含量成反比。

 

3.試劑盒組成

已包被抗原的酶標(biāo)板(Kanamycin-coated Plate)(可拆式) 1×96孔

標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)(0,0.2,0.61.8,5.4,16.2ppb) 6×1.0mL

高標(biāo)液1000ppb(Spiking) 1.0mL

一抗(Antibody #1) 1×6.0mL

HRP酶標(biāo)二抗(HRP-Conjugated Ab#2) 1×6.0mL

10×樣品稀釋10×Sample diluent) 1×15mL

20×濃縮洗液(Wash Solution) 1×28mL

TMB底物(TMB Substrate) 1×12mL

終止液(Stop Buffer) 1×12mL

10×樣品提取(10×Sample Ext. Buffer)(選) 15mL

樣品平衡液(Sample Balance buffer) 2.0mL

本試劑盒應(yīng)當(dāng)在2-8℃的溫度下儲存,有效期為一年。如果超過1個月不使用試劑盒,請

將標(biāo)品、一抗和二抗放置-20℃或者冰凍保存。

 

4.檢測限

檢測物質(zhì)

檢測下限(ng/g)

//肉類/肝/腎

8

            細(xì)胞裂解液

2

血/尿

5

牛奶

2

 

5.交叉反應(yīng)

交叉反應(yīng)物質(zhì)

交叉反應(yīng)率(%)

卡那霉素(Kanamycin )

100

鏈霉素(Streptomycin

< 0.1

雙氫鏈霉素(Dihydrostreptomycin

< 0.1

新霉素(Neomycin)

< 0.1

 

6.未提的設(shè)備或材料

  • 酶標(biāo)儀
  • 組織勻漿器
  • 漩渦振蕩器
  • 移液器(10、20和100mL,1mL各一支)
  • 多道移液器(50-300mL

7.注意事項

實驗前請閱讀以下文字,以保證獲得佳實驗效果。

  • 標(biāo)準(zhǔn)品中含有卡那霉素,請小心使用。
  • 不要使用過期的試劑盒。
  • 不同批次的試劑盒不要混用,抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。
  • 盡量保持室溫20-25℃,避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低,過熱或者蒸發(fā)。同樣的,不

要在陽光直射下實驗,防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間,如果工作臺溫度過低,應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

  • 水質(zhì)量很重要,確保使用蒸餾或者去離子水。
  • 加入樣品或者試劑到空的微孔板時,吸嘴靠于微孔接近底部,并保持接觸。
  • 孵育時間的計算越規(guī)范越好,保持添加標(biāo)準(zhǔn)品的一致性,先添加標(biāo)準(zhǔn)品后添加樣品。
  • 從低濃度到高濃度地添加標(biāo)準(zhǔn)品,降低影響標(biāo)準(zhǔn)品曲線質(zhì)量的風(fēng)險。
  • 將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中,冷藏保存。

 

8.樣品的準(zhǔn)備

確保樣品的正確保存,一般來說,樣品在2-4只能保存1-2天,如果要保存更長時間,就要保存在-20冷凍保存,在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

 

  • 準(zhǔn)1×樣品稀釋:

1體積 10×樣品稀釋加9體積蒸餾水稀釋。

 

  • 準(zhǔn)備1×樣品提取: 

1體積10×樣品提取加9體積蒸餾水稀釋。

 

細(xì)胞裂解液

  • 取100mL細(xì)胞裂解液,加900mL 1×樣品稀釋,混勻;
  • 離心5分鐘,4000×g;
  • 每孔取50mL上清來檢測。

稀釋倍數(shù):10

 

魚/蝦肉/肝/腎

  • 稱取 1.0 g 勻漿樣品,加 4mL1×樣品提取;
  • 渦流振蕩1分鐘;離心5分鐘,4000×g;
  • 取200mL上清液到干凈的新管中,加入1.375mL 1×樣品稀釋和25mL樣品平衡液,渦流混勻30秒。
  • 每孔取50mL上清來檢測。

稀釋倍數(shù):40

 

/尿

  • 取50mL樣品,加1.2mL 1×樣品稀釋,混勻;
  • 離心5分鐘,4000×g;
  • 每孔取50mL上清來檢測。

稀釋倍數(shù):25

 

  • 100mL奶到一干凈離心管,900mL 1×樣品稀釋
  • 漩渦震蕩30秒;
  • 在4,000 x g離心10分鐘;
  • 每孔取50mL上清來檢測

稀釋倍數(shù):10

 

9.檢測步驟

注意:試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時,確定在使用前閱讀過注意事項。準(zhǔn)備適量的檢測用試劑,所有的試劑搖勻后使用。準(zhǔn)備足夠所有小管所需的用量,不能將試劑倒回原來的瓶子中,處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險。

 

  • 1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合。

 

檢測

以下為計算份量的表格,用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

試劑

每個反應(yīng)需要的體積

24次反應(yīng)的體積

一抗

50 mL

1.2mL

酶標(biāo)二抗

50 mL

1.2mL

工作洗液

1 mL

24 mL

終止液

100 mL

2.4mL

底物

100 mL

2.4mL

  • 加入50mL的標(biāo)準(zhǔn)品于所設(shè)定的孔中;
  • 加入50mL的樣品所設(shè)定的孔中;
  • 按順序在每孔中加入50mL HRP酶標(biāo)二抗和50mL一抗,輕微孔板邊緣混勻30秒;
  • 室溫(22.5±2.5)°C避光孵育30分鐘;
  • 洗板4次,每次應(yīng)該加入250mL 1×洗液,一次使板盡量甩干并在吸水紙上干;
  • 加入100mL的TMB底物;計時,微孔板邊緣混勻30秒;
  • 在室溫(22.5±2.5)°C避光孵育15分鐘,加入100mL的終止液終止反應(yīng);
  • 在450nm下讀OD值 (讀數(shù)前,用無絨布擦拭除去微孔底部的水分和指)。

 

10.結(jié)果計算

  • 分別計算標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標(biāo)準(zhǔn)或樣品吸光度值/零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值) ´ 100

  • 以相對吸光度值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  • 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。

以下曲線圖是卡那霉素酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒典型標(biāo)準(zhǔn)曲線

 

 

 

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