產(chǎn)品推薦:原料藥機(jī)械|制劑機(jī)械|藥品包裝機(jī)械|制冷機(jī)械|飲片機(jī)械|儀器儀表|制藥用水/氣設(shè)備|通用機(jī)械

技術(shù)中心

制藥網(wǎng)>技術(shù)中心>選購(gòu)指南>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

一秒鐘了解pcr耗材,八聯(lián)排管、pcr96孔板的選擇

來(lái)源:上海聯(lián)碩生物科技有限公司   2021年03月01日 10:51  

今天,我們來(lái)聊聊PCR實(shí)驗(yàn)中很關(guān)鍵的要素——耗材。作為PCR常客,了解PCR耗材相關(guān)的特性和術(shù)語(yǔ)是有必要的。
市面上的PCR耗材有很多,各種品牌、規(guī)格、顏色等,讓人眼花繚亂。我們來(lái)慢慢認(rèn)識(shí)它。材質(zhì)PCR耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一種很好的耐熱惰性物質(zhì)(使用溫度范圍為-30~140℃),能夠承受PCR反應(yīng)熱循環(huán)過(guò)程中的熱能變化,很好地封閉和保護(hù)PCR反應(yīng)體系中的物質(zhì)。

顏色常見的有白管和透明管。在傳統(tǒng)PCR實(shí)驗(yàn)中,兩者沒有區(qū)別。但是,在相同的熒光定量/qPCR實(shí)驗(yàn)中,對(duì)于頂端信號(hào)讀取qPCR儀器(在管的上方采集熒光信號(hào))來(lái)說(shuō),白管的靈敏度一致性相對(duì)更高(下圖A和B)。這是為什么呢?
與透明管相比,A  白管得到的Ct值更低;B  白管得到的重復(fù)性更好

qPCR的核心數(shù)據(jù)是Ct值,而熒光信號(hào)是Ct值計(jì)算的數(shù)據(jù)來(lái)源,所以管內(nèi)的熒光能否完好地傳遞至檢測(cè)器是至關(guān)重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過(guò)管壁和折射(下圖A),進(jìn)而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁),被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管,在白管的頂端能夠采集到更強(qiáng),更聚焦的熒光信號(hào)(下圖B)。

A  透明管和白管中熒光信號(hào)走向;B  分別加入等量熒光素后,熒光強(qiáng)度對(duì)比

So,假如你正在使用的是頂讀qPCR儀,那么安利一下,不妨用白管試試哦~

  • 質(zhì)量(是否干凈)這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量的重要性。qPCR耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和DNA酶,但不能去除灰塵和DNA殘留,它們可能會(huì)抑制PCR反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。物質(zhì)是具有吸光度的,即便是很小的污染物也會(huì)吸收反應(yīng)體系中的熒光,影響熒光信號(hào)的采集。用一個(gè)夸張版的實(shí)驗(yàn)來(lái)演示一下雜質(zhì)污染對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響,如下圖所示,在八聯(lián)排的一個(gè)反應(yīng)孔中放入一粒雜質(zhì),不出所料,擴(kuò)增結(jié)果曲線出現(xiàn)了顯著的異常。 
  • ↑  8復(fù)孔重復(fù)性反應(yīng)結(jié)果,左邊孔中的雜質(zhì)讓曲線“跑偏”

Tips  注意不要讓耗材長(zhǎng)期暴露在空氣中,取出耗材后,一定要快速封好包裝袋,避免用裸手接觸。有條件的話,可在超凈臺(tái)中操作。容量/尺寸/通量
容量決定了可加樣的多少(反應(yīng)體積)。加樣過(guò)多會(huì)導(dǎo)致熱傳導(dǎo)效率下降,溢出或交叉污染;而加樣不足會(huì)引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR儀的加熱模塊也會(huì)決定可適配的耗材和適用的反應(yīng)體系大小。通量很容易理解,就是單次實(shí)驗(yàn)?zāi)苌隙嗌賯€(gè)樣品。常見的容量和通量規(guī)格如下表所示:

 

 

單管/八聯(lián)排

0.2mL、0.1mL

96孔板

0.2mL、0.1mL

384孔板

0.02mL

容量規(guī)格也常用標(biāo)準(zhǔn)和低容量來(lái)區(qū)分,如下圖所示。low profile(低容)耗材的高度更低,這種短小的設(shè)計(jì)減少了反應(yīng)體系上方的空間(“死體積”——無(wú)用部分),降低熱循環(huán)過(guò)程中的蒸發(fā)影響,同時(shí)能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹,提高熱傳導(dǎo)效率。因此,低容管也被稱為“快速”管或板。


Tips  常見的反應(yīng)體積一般為20 µL,推薦使用0.1 mL或low profile的低容反應(yīng)管。管壁厚度
PCR耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的熱傳導(dǎo)。超薄管壁較標(biāo)準(zhǔn)版薄50%,可進(jìn)一步減少熱屏障,帶來(lái)更快更好的反應(yīng)效果。當(dāng)然,建議選超薄的。
透明度qPCR的管蓋和封膜需要具有很高的光學(xué)透性,確保的熒光信號(hào)的穿透和傳遞,減少失真(針對(duì)頂讀qPCR儀)。管壁的透明度越高反倒會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,理由在前面解釋過(guò)。傳統(tǒng)PCR可忽略此特點(diǎn)。裙邊PCR板的裙邊指的是板的周圍延伸部分。額.......這個(gè)裙邊作用是在構(gòu)建反應(yīng)體系時(shí)為移液過(guò)程提供穩(wěn)定性支撐,以及結(jié)合自動(dòng)化工作站時(shí)提供機(jī)械強(qiáng)度和抓手。常見的有三種:無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊(對(duì)應(yīng)下圖A、B、C)。
Tips  簡(jiǎn)單理解就是,裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動(dòng)化批量處理提供便利,與機(jī)械臂的結(jié)合。在常規(guī)科研實(shí)驗(yàn)室中可能不太需要,使用無(wú)裙邊板即可。

封板膜
PCR封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見,適配于96或384孔板,要有足夠好的光透性。可以在封膜時(shí)用個(gè)小卡片把孔周圍的膜壓緊,避免漏氣等現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)室里的貼膜boy們應(yīng)該很熟悉了吧??梢院?jiǎn)單理解為......

黏性鋁膜可能比較少見,盡管不適合qPCR,但對(duì)于光敏樣品還是合適的耗材,由于可以穿刺,便于PCR中樣品轉(zhuǎn)移。(適用于傳統(tǒng)PCR)

總結(jié)
耗材作為PCR體系的載體,對(duì)提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量是非常重要的。希望本分享能夠讓你了解PCR耗材的一些小知識(shí),為更好地選擇耗材提供幫助。ok,就到這兒了,下回見咯~

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明"來(lái)源:制藥網(wǎng)"的所有作品,版權(quán)均屬于制藥網(wǎng),轉(zhuǎn)載請(qǐng)必須注明制藥網(wǎng),http://thanksk.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。
  • 企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容,如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的,一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任,本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來(lái)源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618