隨著中國(guó)2010版GMP的順利頒布，無(wú)菌藥品、風(fēng)險(xiǎn)和驗(yàn)證，再次成為制藥行業(yè)內(nèi)討論的熱點(diǎn)。除菌過(guò)濾工藝的風(fēng)險(xiǎn)和驗(yàn)證，也因?yàn)閲?guó)外法規(guī)和新版GMP對(duì)其的關(guān)注，成為了業(yè)內(nèi)普遍關(guān)注的問(wèn)題。在本文中，三位作者通過(guò)問(wèn)答的創(chuàng)新形式，對(duì)一些國(guó)內(nèi)存在認(rèn)知模糊的問(wèn)題，有針對(duì)性地進(jìn)行了解答和闡釋。
　　
　　問(wèn)：什么是除菌過(guò)濾工藝？
　　
　　答：除菌過(guò)濾是指在不影響產(chǎn)品質(zhì)量的前提下，過(guò)濾去除流體中微生物的工藝過(guò)程。以液體過(guò)濾為例，雖然符合上述定義描述的工藝過(guò)程在藥品生產(chǎn)中有著廣泛和普遍的應(yīng)用，但是，我們需要區(qū)別下述兩種不同的情形：*種是指因?yàn)楫a(chǎn)品、中間體或者其他過(guò)程料液具有不穩(wěn)定性，不能采用包括熱滅菌在內(nèi)的被監(jiān)管部門(mén)認(rèn)可的zui終滅菌方法，而采用過(guò)濾除菌的方法，并要求濾出液無(wú)菌的情況；第二種則是指采用具有不同精度（poresizerating）的過(guò)濾器，甚至是除菌過(guò)濾器，對(duì)工藝流體進(jìn)行過(guò)濾，而對(duì)濾出液只有微生物污染水平的要求，并沒(méi)有無(wú)菌要求的情況。
　　
　　上述二者中，前者可以被理解為是對(duì)除菌過(guò)濾的狹義定義，簡(jiǎn)稱(chēng)“除菌過(guò)濾”；而后者是更廣義的概念，通常被稱(chēng)為“微生物污染水平（bioburden）控制過(guò)濾”，該過(guò)程中使用的過(guò)濾器被稱(chēng)為“微生物污染水平控制過(guò)濾器”，以區(qū)別于*種情況。在不同應(yīng)用中，法規(guī)對(duì)過(guò)濾器的驗(yàn)證要求，也有區(qū)別的。
　　
　　問(wèn)：除菌過(guò)濾工藝風(fēng)險(xiǎn)程度如何？
　　
　　答：西方醫(yī)藥監(jiān)管部門(mén)在總結(jié)長(zhǎng)期制藥實(shí)踐的基礎(chǔ)上，對(duì)制藥工藝過(guò)程中各種滅菌方法的選擇，均在基于風(fēng)險(xiǎn)的原則上，提出決策判斷的順序和原則。歐盟醫(yī)藥管理局（EMA）更將這樣的決策原則和過(guò)程概括為“決策樹(shù)”的形式，作為法規(guī)性指南發(fā)布，其思想影響深遠(yuǎn)，被各類(lèi)行業(yè)指南和技術(shù)參考資料所廣泛引用。中國(guó)新版GMP和藥典（2010版）中，在有關(guān)滅菌方法的條款和規(guī)定中，也體現(xiàn)了上述思想。
　　
　　上述歐盟滅菌決策樹(shù)指出：在所有滅菌方法中，應(yīng)當(dāng)終端濕熱滅菌方法，即對(duì)無(wú)菌藥品的zui終成品進(jìn)行滅菌；因產(chǎn)品組分的熱不穩(wěn)定性造成不能采用過(guò)度殺滅的熱滅菌條件時(shí)，應(yīng)考慮采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證并達(dá)到法規(guī)要求的無(wú)菌保證水平（SAL）的其他zui終滅菌方法和/或參數(shù)；只有在產(chǎn)品不能耐受上述zui終滅菌條件時(shí)，才考慮采用除菌過(guò)濾工藝和無(wú)菌操作相結(jié)合的方式，進(jìn)行藥品的生產(chǎn)。如果產(chǎn)品不能耐受除菌過(guò)濾，或者不能進(jìn)行除菌過(guò)濾，zui高風(fēng)險(xiǎn)的生產(chǎn)工藝為無(wú)菌配藥和灌裝。
　　
　　由此可見(jiàn)，除菌過(guò)濾工藝在上述決策過(guò)程中，處在一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)很高的位置。
　　
　　問(wèn)：除菌過(guò)濾器的定義是什么？
　　
　　答：目前，各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)除菌過(guò)濾器的定義都已經(jīng)有了統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)，并被寫(xiě)入法規(guī)要求或指南中。
　　
　　美國(guó)ASTMF-838標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)在已經(jīng)成為確認(rèn)和驗(yàn)證液體除菌級(jí)過(guò)濾器微生物截留效能的標(biāo)準(zhǔn)方法，即每平方厘米有效過(guò)濾面積挑戰(zhàn)水平達(dá)到107CFU，挑戰(zhàn)微生物為缺陷假單胞菌（Brevundimonasdiminuta,ATCC19146）的情況下，濾出液無(wú)菌的過(guò)濾器。
　　
　　目前市場(chǎng)上，除菌過(guò)濾器通常被標(biāo)示為0.2μm或者0.22μm孔徑精度，但是，應(yīng)當(dāng)注意兩點(diǎn)，即：這兩種精度是可以互換的，沒(méi)有區(qū)別；非除菌級(jí)的過(guò)濾器產(chǎn)品，也有標(biāo)示為0.2μm（或者0.22μm）精度的。因而，選擇和判斷過(guò)濾器是否是“除菌級(jí)”的，不能僅根據(jù)其孔徑是否為0.2μm（或者0.22μm）精度，還需要根據(jù)上述法規(guī)中的定義進(jìn)行。
　　
　　問(wèn)：如何在藥品生產(chǎn)過(guò)程中，利用質(zhì)量管理手段，降低除菌過(guò)濾工藝的風(fēng)險(xiǎn)，以達(dá)到無(wú)菌保障的預(yù)期要求？
　　
　　答：采用經(jīng)過(guò)適當(dāng)驗(yàn)證的除菌過(guò)濾器，是降低該工藝風(fēng)險(xiǎn)的有效手段之一。
　　
　　藥品作為特殊商品，應(yīng)當(dāng)以高度保證的方式進(jìn)行生產(chǎn)，以達(dá)到所有預(yù)先確定的標(biāo)準(zhǔn)。無(wú)菌藥物生產(chǎn)中采用的所有滅菌方法，例如濕熱滅菌和干熱滅菌，按照國(guó)內(nèi)外的要求，均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證研究。其中，除菌過(guò)濾工藝作為風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)高于熱滅菌方法的工藝過(guò)程，對(duì)其進(jìn)行工藝驗(yàn)證的必要性和重要性，也就無(wú)須贅言了。
　　
　　美國(guó)和歐盟的藥品注冊(cè)指南和/或GMP法規(guī)指南中，均提出需要對(duì)除菌過(guò)濾工藝的細(xì)菌截留效率進(jìn)行特定產(chǎn)品驗(yàn)證，即對(duì)所用的除菌過(guò)濾器在特定產(chǎn)品和設(shè)定的工藝條件下進(jìn)行驗(yàn)證研究。
　　
　　問(wèn)：在無(wú)菌保障方面，*國(guó)家的法規(guī)對(duì)除菌過(guò)濾器提出了哪些驗(yàn)證要求？
　　
　　答：對(duì)于狹義概念上的除菌過(guò)濾中使用的除菌過(guò)濾器，美國(guó)和歐盟的GMP指南在無(wú)菌保障方面，均提出了需要考察的四點(diǎn)要求，分別為：產(chǎn)品（工藝流體）對(duì)挑戰(zhàn)微生物的生存性的影響、采用真實(shí)產(chǎn)品（工藝流體）和“zui差條件”進(jìn)行的微生物截留工藝驗(yàn)證、過(guò)濾器的完整性檢測(cè)和完整性檢測(cè)數(shù)值需要與微生物截留驗(yàn)證數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)。
　　
　　對(duì)這4點(diǎn)要求的具體含義，詳細(xì)解釋如下：
　　
　　產(chǎn)品（工藝流體）對(duì)挑戰(zhàn)微生物的生存性的影響
　　
　　直接在真實(shí)產(chǎn)品（工藝流體）中接種測(cè)試微生物是除菌級(jí)過(guò)濾器微生物截留能力工藝驗(yàn)證的方法。但是，只有當(dāng)產(chǎn)品（工藝流體）被證明在工藝條件下沒(méi)有殺菌效力的時(shí)候，即產(chǎn)品對(duì)挑戰(zhàn)微生物的生存性沒(méi)有影響時(shí)，才是可行的，否則需要采用替代方法進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。這就是本項(xiàng)驗(yàn)證的目的，也是法規(guī)要求本驗(yàn)證在微生物截留工藝驗(yàn)證前進(jìn)行的原因。
　　
　　微生物截留效率的工藝驗(yàn)證
　　
　　該驗(yàn)證研究的目的是獲得文件證據(jù)，證明在模擬工藝條件下，過(guò)濾過(guò)程可以持續(xù)去除懸浮于產(chǎn)品（或替代流體）中的一定數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌或相關(guān)微生物污染分離物。該驗(yàn)證需要考慮實(shí)際工藝的“zui差條件”，zui大限度地保證在正常生產(chǎn)工藝中，除菌過(guò)濾可以達(dá)到法規(guī)要求的無(wú)菌保障水平。這部分工藝驗(yàn)證，是在過(guò)濾器生產(chǎn)商可以提供成品過(guò)濾器在標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)條件下，使用參考流體（如水、乳糖肉湯），可達(dá)到除菌過(guò)濾器的微生物截留效能的基礎(chǔ)上完成的。對(duì)過(guò)濾器生產(chǎn)商提供的該部分研究資料進(jìn)行確認(rèn)，是藥品生產(chǎn)企業(yè)選擇除菌過(guò)濾器供應(yīng)商時(shí)zui核心的審計(jì)工作。
　　
　　按照慣例，采用添加污染物進(jìn)入真實(shí)產(chǎn)品而進(jìn)行的工藝驗(yàn)證（spiking/spikedstudy），均可以采用縮小規(guī)模的方法。對(duì)于本項(xiàng)驗(yàn)證也是如此。因?yàn)檠芯康哪康氖亲C明特定膜材構(gòu)成的過(guò)濾器在真實(shí)工藝中的微生物截留效能，那么使用小的測(cè)試膜片通常被認(rèn)為是可以滿足要求的。
　　
　　完整性檢測(cè)
　　
　　對(duì)除菌過(guò)濾器進(jìn)行完整性檢測(cè)，是指過(guò)濾器在液體潤(rùn)濕的狀態(tài)下，對(duì)其進(jìn)行的一項(xiàng)物理檢測(cè)。雖然本項(xiàng)檢測(cè)不能被認(rèn)為是驗(yàn)證研究，尤其在使用水等參考流體進(jìn)行過(guò)濾器潤(rùn)濕時(shí)（如果采用實(shí)際產(chǎn)品（料液）作為潤(rùn)濕流體，需要完成該種條件下完整性數(shù)值與參比流體（如水）潤(rùn)濕的完整性數(shù)值的關(guān)聯(lián)，這個(gè)關(guān)聯(lián)過(guò)程，也是一項(xiàng)驗(yàn)證研究），但是，因?yàn)榍笆龅奈⑸锝亓魧?shí)驗(yàn)本身對(duì)GMP級(jí)的生產(chǎn)場(chǎng)地和擬用于正式生產(chǎn)中的過(guò)濾器，都是破壞性的，因而，該項(xiàng)檢測(cè)就成為建立擬用于生產(chǎn)的過(guò)濾器與經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的過(guò)濾器“同一性”的重要手段，也是日常藥品生產(chǎn)中，對(duì)除菌過(guò)濾這個(gè)高風(fēng)險(xiǎn)工藝環(huán)節(jié)中使用的核心設(shè)備——除菌過(guò)濾器——進(jìn)行質(zhì)量控制的必要監(jiān)測(cè)點(diǎn)。
　　
　　完整性檢測(cè)數(shù)值與微生物截留效能的關(guān)聯(lián)
　　
　　如前所述，微生物截留驗(yàn)證是一種破壞性試驗(yàn)，不能用來(lái)證明將用于生產(chǎn)的過(guò)濾器的完整性。非破壞性物理性完整性測(cè)試的主要目的，是在不破壞過(guò)濾器的前提下確定是否存在可能危及過(guò)濾器截留能力的缺陷。因而，如何建立完整性檢測(cè)限值，是過(guò)濾器的使用者——藥品生產(chǎn)企業(yè)——非常需要關(guān)注的。
　　
　　該項(xiàng)檢測(cè)的限值，是過(guò)濾器制造商通過(guò)對(duì)一系列具有不同完整性測(cè)試值的過(guò)濾器進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)，直至觀察到某些過(guò)濾器發(fā)生微生物透過(guò)，據(jù)此來(lái)為該類(lèi)型過(guò)濾器的物理完整性檢測(cè)設(shè)立限值的過(guò)程。
　　
　　因此，如果沒(méi)有通過(guò)這樣的實(shí)驗(yàn)關(guān)聯(lián)設(shè)定的限值和不依據(jù)此限值進(jìn)行完整性檢測(cè)，僅僅是對(duì)過(guò)濾器進(jìn)行物理檢測(cè)，既不能作為藥品生產(chǎn)中的質(zhì)量控制手段，對(duì)藥品的無(wú)菌保障，也是沒(méi)有任何意義的。
　　
　　問(wèn)：除無(wú)菌保障方面的考慮外，對(duì)除菌過(guò)濾器是否還需要進(jìn)行其他驗(yàn)證？
　　
　　答：過(guò)濾器作為直接接觸藥品的生產(chǎn)設(shè)備，同時(shí)受到GMP其他相關(guān)條款的約束。具體為：過(guò)濾器不得因與產(chǎn)品發(fā)生反應(yīng)、釋放物質(zhì)或吸附作用而對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。直接與產(chǎn)品接觸的生產(chǎn)設(shè)備表面不得因與產(chǎn)品發(fā)生反應(yīng)、釋放物質(zhì)或吸附作用而對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。歐美GMP和中國(guó)新版GMP，在此點(diǎn)上都提出了相同或者類(lèi)似的要求。
　　
　　應(yīng)當(dāng)注意，受到上述法規(guī)約束的過(guò)濾器既包括除菌過(guò)濾器、微生物污染水平控制過(guò)濾器，也同樣包括用于各種制藥生產(chǎn)工藝中去除顆粒污染物、符合上述法規(guī)要求與藥品直接接觸的過(guò)濾器。
　　
　　對(duì)于直接與藥品接觸的相關(guān)法規(guī)要求，通常過(guò)濾器的生產(chǎn)者和使用者，均需要完成以下各種檢測(cè)和驗(yàn)證研究：
　　
　　過(guò)濾器與工藝流體的交互反應(yīng)
　　
　　因除菌過(guò)濾往往是藥品生產(chǎn)的zui終工序之一。應(yīng)評(píng)估過(guò)濾器對(duì)zui終產(chǎn)品的影響。調(diào)查范圍為溶出物和析出物、化學(xué)兼容性和吸附作用。這些驗(yàn)證，應(yīng)當(dāng)盡可能用真實(shí)的產(chǎn)品或者可以模擬產(chǎn)品的替代流體來(lái)進(jìn)行。
　　
　　過(guò)濾器的清潔度
　　
　　應(yīng)考慮從過(guò)濾器、過(guò)濾器硬件、過(guò)濾器安裝和使用過(guò)程中引入的顆粒物污染，因?yàn)槊總€(gè)來(lái)源都可能增加產(chǎn)品的顆粒物負(fù)荷，影響產(chǎn)品質(zhì)量。
　　
　　顆粒物之外，液體過(guò)濾器還可能是其他污染的來(lái)源，如內(nèi)毒素、有機(jī)碳或易氧化物?？赡艿膩?lái)源包括表面活性劑、潤(rùn)濕劑、塑料元件生產(chǎn)中的添加劑、生產(chǎn)過(guò)程碎片殘留和結(jié)構(gòu)材料。
　　
　　通過(guò)濾出液的檢查，可以很好地監(jiān)測(cè)過(guò)濾器的生產(chǎn)過(guò)程，是過(guò)濾器生產(chǎn)商對(duì)每批過(guò)濾器均應(yīng)當(dāng)進(jìn)行的檢測(cè)。過(guò)濾器的使用者，在完成zui初產(chǎn)品選擇時(shí)，需要考慮進(jìn)行這樣的檢測(cè)，作為評(píng)估過(guò)濾器質(zhì)量的依據(jù)之一，在日常的生產(chǎn)使用中，對(duì)過(guò)濾器進(jìn)行預(yù)沖洗可以降低顆粒物和污染物的水平，也可以作為完整性檢測(cè)之前的潤(rùn)濕過(guò)程的一部分來(lái)完成。
　　
　　液體過(guò)濾器安全性
　　
　　為無(wú)菌藥品除菌過(guò)濾選擇過(guò)濾器的重點(diǎn)之一是評(píng)估濾材和過(guò)濾裝置的安全性，以確認(rèn)其是否會(huì)危害藥品。過(guò)濾器生產(chǎn)商應(yīng)當(dāng)提供過(guò)濾器元件來(lái)源和毒性資料，包括動(dòng)物源的元件的來(lái)源。過(guò)濾器不應(yīng)對(duì)被過(guò)濾流體釋放有毒物質(zhì)。過(guò)濾器生產(chǎn)商應(yīng)按照法定方法對(duì)過(guò)濾器的安全進(jìn)行鑒定。檢測(cè)結(jié)果通常應(yīng)成為過(guò)濾器“驗(yàn)證指南”的一部分。對(duì)該資料的審核和確認(rèn)，也是過(guò)濾器使用者應(yīng)當(dāng)進(jìn)行的供應(yīng)商審計(jì)工作之一。
　　
　　問(wèn)：什么是除菌過(guò)濾器驗(yàn)證時(shí)需要考慮的zui差條件？
　　
　　答：因?yàn)槌^(guò)濾器在制藥行業(yè)有廣泛的使用，所以同樣型號(hào)、制式的過(guò)濾器產(chǎn)品，可能應(yīng)用于不同的產(chǎn)品、不同的工藝點(diǎn)和/或同樣產(chǎn)品的不同工藝點(diǎn)。在按照法規(guī)要求進(jìn)行各項(xiàng)工藝驗(yàn)證時(shí)，除了應(yīng)當(dāng)關(guān)注工藝驗(yàn)證的各項(xiàng)原則外，在產(chǎn)品分組和驗(yàn)證條件的選擇上需要考慮“zui差條件”（worstcase）。
　　
　　生產(chǎn)中的zui差條件是指接近標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）規(guī)定的上限或下限的操作條件或操作條件組合，產(chǎn)品和工藝在該種情況下失敗幾率高于理想操作條件。評(píng)估工藝參數(shù)和生產(chǎn)中的zui差條件后，選擇相應(yīng)的參數(shù)和條件進(jìn)行工藝驗(yàn)證，將覆蓋今后日常生產(chǎn)中可能遇到的各種情況，使工藝驗(yàn)證代表性得到提高。
　　
　　另一方面，如果可以證明，產(chǎn)品家族中的某個(gè)或某幾個(gè)可以代表zui差條件，那么選擇其進(jìn)行工藝驗(yàn)證，就可以代表整個(gè)產(chǎn)品家族，減小驗(yàn)證的工作量和成本。
　　
　　小結(jié)
　　
　　縱觀國(guó)內(nèi)外藥品監(jiān)管法規(guī)的發(fā)展，我們不難發(fā)現(xiàn)，在化的大背景之下，藥品注冊(cè)和GMP監(jiān)管，在各國(guó)、各區(qū)域之間的“協(xié)調(diào)一致”（harmonization）和互認(rèn)，已經(jīng)是不爭(zhēng)的發(fā)展趨勢(shì)。歐盟、美國(guó)和日本，在藥品注冊(cè)領(lǐng)域，成立了注冊(cè)協(xié)調(diào)互認(rèn)機(jī)構(gòu)——ICH，其發(fā)布的各種指南，已經(jīng)擁有了*的影響力；致力于GMP標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致的合作組織——PIC/S，其指南文件的影響力，也早就超出了歐洲的范圍。
　　
　　中國(guó)作為經(jīng)濟(jì)快速增長(zhǎng)的發(fā)展中國(guó)家，一方面由于生活水平的迅速提高，人們對(duì)藥品安全性這樣的基本健康保健問(wèn)題，將很快達(dá)到與西方發(fā)達(dá)國(guó)家一致的認(rèn)識(shí)水平，任何短視的、忽視安全性的做法，都不會(huì)被市場(chǎng)所長(zhǎng)久認(rèn)可；另一方面，眾多的中國(guó)制藥企業(yè)，已經(jīng)擁有了在市場(chǎng)中逐鹿的愿望和能力，那么符合監(jiān)管法規(guī)的要求，就成為進(jìn)入市場(chǎng)的*道門(mén)檻。
　　
　　（作者：頗爾中國(guó)生命科學(xué)部 董巍，謝華，蔡清波）