產(chǎn)品推薦:原料藥機(jī)械|制劑機(jī)械|藥品包裝機(jī)械|制冷機(jī)械|飲片機(jī)械|儀器儀表|制藥用水/氣設(shè)備|通用機(jī)械

技術(shù)中心

制藥網(wǎng)>技術(shù)中心>應(yīng)用案例>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

超高效液相色譜UPLC在中藥分析中的應(yīng)用

來(lái)源:上海隱智科學(xué)儀器有限公司   2023年03月01日 09:57  

超高效液相色譜UPLC使得藥學(xué)工作者可以在更短的時(shí)間、更高的色譜分離度、更少的溶劑消耗下對(duì)中藥復(fù)雜樣品進(jìn)行分析測(cè)定。UPLC在中藥的化學(xué)成分識(shí)別、指紋圖譜及代謝組學(xué)等分析領(lǐng)域逐步得到了應(yīng)用,促進(jìn)了中藥的質(zhì)量評(píng)控。

 

超高效液相色譜UPLC與不同檢測(cè)器聯(lián)用在中藥分析中的應(yīng)用

 

1. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用

 

超高效液相色譜UPLC與不同檢測(cè)器聯(lián)用,可以對(duì)含不同化學(xué)類型的中藥進(jìn)行研究,尤其是結(jié)合指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中顯示出了亮眼的優(yōu)勢(shì)。比較土茯苓藥材的UPLC-UV和HPLC-UV指紋圖譜,結(jié)果顯示HPLC需要75 min才能完成分析,而UPLC在10 min內(nèi)完成了色譜分離,大大節(jié)省了分析時(shí)間。采用UPLC-UV法對(duì)大黃中5種蒽醌衍生物進(jìn)行分析測(cè)定,結(jié)果顯示HPLC需要30min才能完成分析,而UPLC在3min內(nèi)即完成色譜分離,分析效率提高了10倍。針對(duì)HPLC難以分離的紅參類藥材,開(kāi)展了基于UPLC-UV的紅參研究,得到了高分離度和高純度的色譜指紋圖譜,該研究建立的方法具有專屬性強(qiáng)、分離度高、色譜峰純度高的特點(diǎn),可用于人參類藥材的品種鑒定和質(zhì)量控制。

 

針對(duì)一些含皂苷類或化學(xué)成分無(wú)紫外吸收的中藥,UPLC-ELSD則優(yōu)勢(shì)盡顯。采用UPLC-UV-ELSD法對(duì)6個(gè)產(chǎn)地28個(gè)批次西洋參藥材的指紋圖譜進(jìn)行聚類分析、主成分分析及相似度評(píng)價(jià)等研究,為西洋參藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了參考方法。建立了UPLC-ESLD法同時(shí)測(cè)定北柴胡藥材中柴胡皂苷a、c、d的含量,是評(píng)價(jià)北柴胡藥材質(zhì)量的一種較好的方法。建立超聲輔助固液萃取與UPLC-ELSD相結(jié)合同時(shí)提取和測(cè)定天然牛黃和替代品中6種膽汁酸含量的方法,測(cè)定結(jié)果顯示,這些樣品的內(nèi)在質(zhì)量存在一定差異。利用UPLC-ELSD指紋圖譜分析和測(cè)定生物堿來(lái)研究貝母硫熏蒸過(guò)程的潛在破壞作用,該研究表明硫熏蒸對(duì)樣品中的主要活性成分損失較大。

 

2. UPLC與UV、ELSD聯(lián)用在中成藥指紋圖譜與定量分析中的應(yīng)用

 

由于中成藥的化學(xué)成分比單味藥材的化學(xué)成分更加復(fù)雜,常規(guī)HPLC往往在較短的時(shí)間內(nèi)很難獲得分離度較高的色譜圖,超高效液相色譜UPLC的高分離度幫助藥學(xué)工作者可以更好地應(yīng)對(duì)分離中成藥中復(fù)雜成分的挑戰(zhàn)。利用UPLC-UV對(duì)益*草顆粒和益*草膏中的益母草堿進(jìn)行了含量測(cè)定,進(jìn)一步完善了益母草制劑的質(zhì)量控制方法。運(yùn)用UPLC-UV對(duì)葛根芩連湯中11種成分進(jìn)行了含量測(cè)定,結(jié)果表明新建立的質(zhì)控方法具有更好的質(zhì)量評(píng)控力。運(yùn)用UPLC-UV比較了三七原料藥和顆粒劑中5種成分的含量差異,定性、定量地評(píng)價(jià)了三七不同產(chǎn)品的質(zhì)量信息,獲得比較滿意的結(jié)果。建立UPLC-DAD-ELSD切換波長(zhǎng)法并應(yīng)用于酸棗仁顆粒中8種成分的含量測(cè)定,對(duì)酸棗仁顆粒的質(zhì)量控制評(píng)價(jià)提供了參考方法。利用UPLC-UV建立了復(fù)方芪麻膠囊的指紋圖譜,并定量測(cè)定了8種成分,建立了該制劑一種比較全面的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。利用UPLC-UV建立了葛*芩*丸的指紋圖譜及7種成分的定量測(cè)定方法,與之前單一質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)相比,提升了其質(zhì)量控制水平。

 

3. UPLC與MS聯(lián)用在中藥/中成藥成分辨識(shí)中的應(yīng)用

 

超高效液相色譜UPLC與質(zhì)譜(mass spectrometer,MS)檢測(cè)器聯(lián)用可以改善質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量。由于低流速下色譜峰擴(kuò)散較小,增加了峰濃度,有利于提高離子源的效率。同時(shí)UPLC強(qiáng)大的分離能力有助于目標(biāo)化合物和與之競(jìng)爭(zhēng)電離的雜質(zhì)峰的分離,從而使MS的靈敏度由于離子抑制現(xiàn)象的減弱而得到進(jìn)一步的提高。故UPLC與MS聯(lián)用可以獲得靈敏度更高、質(zhì)量更好的信息,在提高分離效能、縮短分析時(shí)間的同時(shí)大大提高了檢測(cè)靈敏度,有利于中藥或中成藥中復(fù)雜成分的分析。

 

運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS快速分析了人參根中的皂苷類化合物,共鑒定出27種化合物,新建立的方法成功地應(yīng)用于分析同一產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)時(shí)間的人參干燥主根中皂苷的差異。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS對(duì)未加工和加工的黃連進(jìn)行了化學(xué)成分分析,共鑒定出了13種化合物,其中有3種是初檢測(cè)出,結(jié)合主成分分析結(jié)果表明2種不同加工方式的黃連化學(xué)成分存在顯著差異。在參*扶正注*液中運(yùn)用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS分離鑒定了81個(gè)主要成分,包括有機(jī)酸、氨基酸、寡糖和生物堿等,為該制劑的質(zhì)量評(píng)控奠定了基礎(chǔ)。建立了HPLC-Q-TOF-MS快速鑒定三葉青化學(xué)成分的方法,并用UPLC-Q-MS測(cè)定三葉青中4種成分的含量,結(jié)果表明建立的UPLC-Q-MS定量分析方法快捷、準(zhǔn)確,為綜合評(píng)價(jià)三葉青的質(zhì)量提供參考。運(yùn)用UPLC- DAD-Q-TOF-MS對(duì)連**瘟膠囊的主要成分進(jìn)行定性、定量分析,通過(guò)比較保留時(shí)間和精確質(zhì)量測(cè)定及參考化合物或文獻(xiàn)數(shù)據(jù),初步確定了包括類黃酮、苯丙素類、蒽醌類、三萜類等61種化合物。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS分析了不同產(chǎn)地泥附子的化學(xué)成分差異,為從次生代謝產(chǎn)物多樣性揭示附子道地性的形成機(jī)制提供了新的參考。運(yùn)用UPLC-Q-TOF-MS對(duì)3種不同種類升麻的化學(xué)成分進(jìn)行快速分析,共鑒定出32種共有組分以及8種不同成分,為進(jìn)一步研究3個(gè)不同品種的升麻提供了參考。運(yùn)用UPLC-TQ-MS法研究了丹*軟膠囊中不同活性成分的溶出規(guī)律,為該中成藥的質(zhì)量評(píng)控提供了參考。

 

4. UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)分析中的應(yīng)用

 

代謝組學(xué)是目前研究中藥藥理作用機(jī)制和發(fā)現(xiàn)活性成分的手段之一,UPLC-MS技術(shù)為中藥代謝組學(xué)分析提供了技術(shù)平臺(tái)。超高效液相色譜UPLC可與多種類型的質(zhì)譜串聯(lián),高分辨質(zhì)譜包括飛行時(shí)間(TOF)、四極桿-飛行時(shí)間(Q-TOF)、串聯(lián)飛行時(shí)間(TOF-TOF)及離子阱-飛行時(shí)間(IT-TOF)質(zhì)譜等。UPLC與高分辨質(zhì)譜串聯(lián)可應(yīng)用于中草藥非靶向代謝組學(xué)的研究,尤其是UPLC-Q-TOF/MS能夠更好地用于代謝物和同分異構(gòu)體的分離鑒定。此外,UPLC還可與三重四級(jí)桿或四極桿離子阱(Q-IT)等串聯(lián)應(yīng)用于中藥靶向代謝組學(xué)分析。目前,新型的串聯(lián)質(zhì)譜如四極桿線性離子阱(Q-Trap)質(zhì)譜由于具有較強(qiáng)的定性和定量能力,與UPLC聯(lián)用在中藥非靶向代謝組學(xué)及靶向代謝組學(xué)方面逐漸得到應(yīng)用。研究嶺南山竹子Garcinia oblongifoliaChamp.ex Benth. 的葉、枝和果實(shí)的比較代謝譜和生物活性,使用UPLC-Q-TOF/MS共鑒定了40種化合物,結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析,揭示了所研究的3種植物代謝物譜的變化和生物活性差異相關(guān)聯(lián),表明UPLC-Q-TOF/MS可用于鑒定在單個(gè)物種的不同部位中差異表達(dá)的生物活性成分。提出了一種基于目標(biāo)糖組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)策略的綜合色譜技術(shù),利用UPLC-ESI-Q-TOF- MS/MS同時(shí)分離鑒定地黃的碳水化合物和次級(jí)代謝物取得了成功,并進(jìn)一步闡明了碳水化合物和次級(jí)代謝產(chǎn)物的化學(xué)轉(zhuǎn)化機(jī)制,從而揭示了碳水化合物和次生代謝產(chǎn)物之間固有的化學(xué)聯(lián)系。利用UPLC-MS背景扣除法聯(lián)合代謝組學(xué)技術(shù)研究了柴胡-白芍藥對(duì)配伍前后化學(xué)成分的整體變化情況,從整體化學(xué)組成上比較了柴胡-白芍藥對(duì)配伍前后的差異,為其配伍機(jī)制的闡釋奠定了基礎(chǔ)。利用基于超高效液相色譜/電噴霧電離synapt高清質(zhì)譜(UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS)結(jié)合模式識(shí)別方法研究了酸棗仁湯治療失眠癥的代謝特征和治療效果,鑒定出20種離子作為“分化代謝物”,結(jié)果表明酸棗仁湯的治療效果可能通過(guò)5-羥色胺能激活介導(dǎo)實(shí)現(xiàn),該研究結(jié)果還表明UPLC/ESI-SYNAPT-HDMS技術(shù)可用于中藥的代謝物分析,開(kāi)辟了使用代謝組學(xué)解決特殊中藥問(wèn)題的新視角。利用UPLC/LTQ-Orbitrap-MS技術(shù)對(duì)復(fù)方祖*麻片抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的血漿代謝組學(xué)進(jìn)行研究,結(jié)果表明復(fù)方祖*麻片主要通過(guò)下調(diào)繼發(fā)性病變期溶血磷脂酰*堿的水平而達(dá)到治療效果。

 

由于樣品組分的分離在先,離子化和檢測(cè)在后,因而能夠有效地減少干擾,諸如基質(zhì)效應(yīng)、離子化抑制、離子化競(jìng)爭(zhēng)等,大幅度增加代謝物的鑒別數(shù)量和準(zhǔn)確度。UPLC-MS除了分析速度快、樣品無(wú)需衍生化等優(yōu)點(diǎn),UPLC的高分離度使得峰寬變窄、信噪比增強(qiáng),從而提高了生物樣品分析的選擇性和靈敏度。因此,與傳統(tǒng)HPLC相比,UPLC能獲得中藥更多代謝物的信息,對(duì)于復(fù)雜生物樣品的分離具有顯著優(yōu)勢(shì),UPLC與MS聯(lián)用在中藥代謝組學(xué)研究中將發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。

 

5. UPLC與MS聯(lián)用在中藥真菌毒素分析中的應(yīng)用

 

目前中藥的安全性檢測(cè)受到越來(lái)越多的關(guān)注和研究,但是中藥含有真菌毒素往往是微量(1~100 μg/g)、痕量(0.01~1 μg/g)級(jí)別,常規(guī)分析手段往往很難到達(dá)檢測(cè)限和定量限。超高效液相色譜UPLC與MS聯(lián)用帶來(lái)的高靈敏度幫助藥學(xué)工作者可以很好地定量分析中藥中的真菌毒素。建立了一種基于QuEChERS-UPLC-Q-MS/MS法定量測(cè)定白茅根中16種真菌毒素,充分利用UPLC的高分離度,獲得了較好的結(jié)果。建立了UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定麥芽中11種真菌毒素的污染水平,通過(guò)相同保留時(shí)間處的特征離子二級(jí)碎片排除了假陽(yáng)性結(jié)果,檢測(cè)限和定量限分別為0.05~30.00 μg/kg和0.15~87.50 μg/kg,表明該方法可以準(zhǔn)確、靈敏、快速地監(jiān)測(cè)麥芽受真菌毒素污染的狀況。使用UHPLC-MS/MS法測(cè)定淡豆豉、麥芽、薏苡仁和酸棗仁中黃曲霉毒素的含量,結(jié)果顯示不同藥材的黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1的檢出限分別為0.04~0.1 μg/kg、0.01~0.02 μg/kg、0.01~0.03 μg/kg和0.02~0.03 μg/kg,表明了該方法具有較高的靈敏度。采用UPLC-MS/MS法對(duì)三七、黨參和柴胡中的黃曲霉毒素進(jìn)行了檢測(cè),該研究表明分離條件對(duì)分離結(jié)果有一定影響,3種藥材中曲霉屬真菌的污染值應(yīng)得到重視。建立了一種基于ESI-LC/MS同時(shí)檢測(cè)三七藥材中10 種真菌毒素方法,結(jié)果表明該方法凈化效果好、靈敏度高、重復(fù)性好,適用于成分復(fù)雜的三七藥材中多種真菌毒素的定量檢測(cè)。對(duì)決明子、菟絲子、薏苡仁等12種藥材種子中黃曲霉毒素G2、G1、B2、B1和赭*霉*素A進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和赭*霉*素A在12種藥材種子中的檢出率較低,但一旦檢測(cè)到即為高水平。實(shí)現(xiàn)快速、準(zhǔn)確地同時(shí)測(cè)定多種真菌毒素一直是中草藥分析領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn),UPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)將會(huì)越來(lái)越多地應(yīng)用于中藥的真菌毒素分析。

 

在實(shí)際應(yīng)用中由于UPLC使用的色譜柱柱填料較小,為防止堵塞,樣品前處理要求更加嚴(yán)格。超高效液相色譜UPLC是在HPLC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,由于UPLC能夠提高色譜分離度、縮短分析時(shí)間、提高分析效率、節(jié)省溶劑消耗,同時(shí)提供智能化的分析,確保分析數(shù)據(jù)的可靠性和高效率,因此將成為中藥分析領(lǐng)域的主要分析手段,其應(yīng)用將會(huì)越來(lái)越多。

 

 

 

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明"來(lái)源:制藥網(wǎng)"的所有作品,版權(quán)均屬于制藥網(wǎng),轉(zhuǎn)載請(qǐng)必須注明制藥網(wǎng),http://thanksk.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。
  • 企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容,如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的,一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任,本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來(lái)源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618