隨著GSK的RSV疫苗獲得FDA批準(zhǔn)上市，2023年即將成為RSV疫苗商業(yè)化元年。而RSV作為一種具有高度傳染性的病毒，可導(dǎo)致所有年齡段個(gè)體的肺部和呼吸道感染，尤其對(duì)老人和嬰兒特別危險(xiǎn)。雖然RSV引起的感染具有自限性，但對(duì)于免疫力低下的兒童和老年人會(huì)發(fā)展為嚴(yán)重的呼吸道感染，因此RSV疫苗接種對(duì)象主要為嬰幼兒和老年人。根據(jù)行業(yè)預(yù)測(cè)，2024-2028年，RSV疫苗和抗體市場(chǎng)將以38.9%的年復(fù)合增長(zhǎng)率增長(zhǎng)，到2028年市場(chǎng)將達(dá)到95.3億美元，其中疫苗市場(chǎng)將占據(jù)大部分市場(chǎng)份額(67.5%)。
目前全球在研的RSV疫苗有近70種，研究企業(yè)除葛蘭素史克(GSK)外，還有輝瑞、楊森、賽諾菲、阿斯利康、默沙東等。目前已布局RSV疫苗研發(fā)的企業(yè)有8家，其中有5款相關(guān)產(chǎn)品已進(jìn)入臨床研究階段。國(guó)內(nèi)的布局者也眾多，包括艾棣維欣、嘉晨西海、艾美疫苗、三葉草、百克生物、智飛生物、藍(lán)鵲生物/沃森生物等。
國(guó)際上RSV 疫苗研發(fā)進(jìn)展(參考第三方總結(jié))
現(xiàn)階段RSV疫苗的研發(fā)主要集中在四大類疫苗，包括減毒活疫苗、病毒載體疫苗、重組亞單位(顆粒)疫苗和核酸疫苗。本文總結(jié)了四種類型的RSV疫苗的工藝方案，其中重組亞單位疫苗的研發(fā)則集中在糖蛋白F上。RSV的表面蛋白G和F在吸附和融合過(guò)程中發(fā)揮重要作用，糖蛋白G可使RSV附著在宿主細(xì)胞上，糖蛋白F可促進(jìn)其進(jìn)入細(xì)胞并導(dǎo)致形成合胞體。由于G蛋白的高度變異性，F(xiàn)蛋白成為疫苗開(kāi)發(fā)的主要抗原。F蛋白有pre-F和post-F兩個(gè)構(gòu)象，pre-F極不穩(wěn)定。很多公司會(huì)進(jìn)行蛋白改造，增加蛋白穩(wěn)定性。
RSV 減毒活疫苗工藝
以賽諾菲研發(fā)的RSV減毒疫苗為例，工藝流程為細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增；病毒感染細(xì)胞，進(jìn)行病毒擴(kuò)增；收獲含病毒料液進(jìn)行核酸酶處理；澄清過(guò)濾；層析可以使用百林科的復(fù)合模式填料MaXtar COLL 700進(jìn)行純化，去除宿主蛋白及宿主核酸，復(fù)合模式填料MaXtar COLL 700的上樣量相對(duì)于分子篩填料有很大優(yōu)勢(shì)；層析流穿液使用中空纖維膜進(jìn)行濃縮換液；進(jìn)行除菌過(guò)濾。
RSV 重組蛋白疫苗工藝
以葛蘭素史克的CHO細(xì)胞表達(dá)的重組RSV疫苗為例，工藝流程為細(xì)胞培養(yǎng)；澄清過(guò)濾，使用深層過(guò)濾去除細(xì)胞碎片等雜質(zhì)，使用0.2 µm過(guò)濾器過(guò)濾以降低微生物負(fù)荷；澄清后的料液經(jīng)過(guò)吐溫80孵育進(jìn)行病毒滅活；第一步層析為親和填料對(duì)病毒滅活后的料液進(jìn)行捕獲，RSV Pre F蛋白可以與特定的親和填料結(jié)合，宿主蛋白流穿，蛋白得到提純并起到濃縮作用；第二步層析為離子交換層析，使用MaXtar Q HR高分辨率陰離子交換填料，結(jié)合洗脫模式去除宿主蛋白、宿主核酸，同時(shí)此步驟也是病毒清除的步驟；第三步層析為復(fù)合模式層析，使用MaXtar MMA陰離子與疏水相互作用復(fù)合填料，結(jié)合洗脫模式，該步驟主要用于去除高低分子量的產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)和宿主蛋白，同時(shí)具有病毒清除效果；層析后納濾膜過(guò)濾，進(jìn)行病毒去除；最后超濾濃縮換液。
RSV 病毒載體疫苗工藝
以腺病毒載體疫苗為例，病毒生產(chǎn)工藝采用HEK293進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；病毒感染；病毒感染后可以用表面活性劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解、核酸酶進(jìn)行宿主核酸的降解；裂解液使用深層過(guò)濾進(jìn)行澄清，使用超濾進(jìn)行濃縮、換液；第一步層析使用后MaXtar Q HR進(jìn)行捕獲，去除雜蛋白；第二步層析使用MaXtar COLL 700進(jìn)行精純，流穿模式；層析后料液使用中空纖維進(jìn)行超濾濃縮換液；除菌過(guò)濾得到疫苗原液。
RSV mRNA疫苗工藝
mRNA類疫苗工藝包括了質(zhì)粒模板的制備、mRNA的合成與純化、LNP的制備及無(wú)菌灌裝等。質(zhì)粒的制備工藝可以選擇經(jīng)典三步法工藝和改進(jìn)兩步法工藝:
mRNA的純化工藝一般采用親和層析Oligo DT進(jìn)行捕獲，還可以選用復(fù)合模式層析填料MaXtar COLL 700/400，此過(guò)程可以去除酶類、NTP及模板DNA等工藝相關(guān)雜質(zhì)；精純階段可以使用高分辨的疏水填料MaXtar Phenyl HR或離子填料MaXtar Q HR，去除片段或dsRNA等產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。
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