為幫助大家能更深入了解深層過(guò)濾，現(xiàn)已正式上線《深思熟“濾”》系列性深層過(guò)濾知識(shí)課堂，今天為大家?guī)?lái)本系列第三篇內(nèi)容。
在前幾期《深思熟“濾”》系列性深層過(guò)濾知識(shí)課堂中我們向大家介紹了深層過(guò)濾技術(shù)，歡迎點(diǎn)擊了解。
本文將圍繞在生物醫(yī)藥行業(yè)主要接觸的細(xì)胞類(lèi)型以及深層過(guò)濾技術(shù)的應(yīng)用展開(kāi)，因內(nèi)容較多，因此分為上下兩篇來(lái)具體闡述，本文為上篇。
深層過(guò)濾介質(zhì)的內(nèi)部有著復(fù)雜交錯(cuò)的結(jié)構(gòu)，所以可以將雜質(zhì)攔截在內(nèi)部網(wǎng)絡(luò)中，從而能去除細(xì)胞碎片而保留例如蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)等目的產(chǎn)物，故而深層過(guò)濾技術(shù)被廣泛用于疫苗、抗體、血液制品、重組蛋白、抗生素生產(chǎn)等。
| 深層過(guò)濾器在生物醫(yī)藥行業(yè)主要接觸的細(xì)胞類(lèi)型
采用了深層過(guò)濾技術(shù)誕生的深層過(guò)濾器產(chǎn)品在生物醫(yī)藥行業(yè)有著普遍的應(yīng)用，主要在于料液的澄清和除雜。
在抗體和疫苗行業(yè)(包含人用抗體和動(dòng)物疫苗等)，主要為細(xì)胞發(fā)酵液的澄清，發(fā)酵后期的細(xì)胞處于衰變期，內(nèi)部產(chǎn)生的目的蛋白已經(jīng)基本形成，細(xì)胞破碎釋放出目的蛋白并且產(chǎn)生大量細(xì)胞碎片，此時(shí)需要采用深層過(guò)濾器盡可能多的除去雜質(zhì)(主要是HCPs和DNA)而盡可能多的保留目的蛋白(一般客戶(hù)要求過(guò)濾前后蛋白損失率低于10%)。
那么細(xì)胞發(fā)酵行業(yè)中應(yīng)用深層濾器較多的細(xì)胞類(lèi)型有哪些呢？上篇在此針對(duì)CHO細(xì)胞及293細(xì)胞展開(kāi)：
CHO細(xì)胞
CHO(Chinese hamster ocary，中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)是細(xì)胞生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的細(xì)胞系，目前70%以上的細(xì)胞治療性抗體蛋白都是由CHO細(xì)胞產(chǎn)生的。
批準(zhǔn)正式應(yīng)用于人類(lèi)疾病治療或疾病預(yù)防的基因工程產(chǎn)品約有三十多種，其中只有一種(乙肝疫苗)是由酵母菌生產(chǎn)的，其余所有產(chǎn)品都是由CHO細(xì)胞和大腸桿菌生產(chǎn)的，大腸桿菌不能形成有活性的二聚體(如白介素2)，也不具有糖基化的功能(如EPO)，而CHO卻具有如上的功能，因此CHO成為表達(dá)復(fù)雜生物大分子的理想宿主。其中CHO-K1細(xì)胞系為其常用系，是野生型細(xì)胞系。
應(yīng)用CHO細(xì)胞進(jìn)行抗體發(fā)酵生產(chǎn)的好處主要在于：
?更適用于懸浮培養(yǎng)(也可進(jìn)行貼壁生長(zhǎng))，可以滿(mǎn)足大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白的要求
?對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行糖基化，其糖型與人類(lèi)基本一致，更接近天然抗體分子
?不易傳播人類(lèi)病毒，比其他哺乳細(xì)胞基因組更容易進(jìn)行改造和拓增
?遺傳背景清楚、轉(zhuǎn)染效率高、可長(zhǎng)期穩(wěn)定傳代并穩(wěn)定表達(dá)有功能活性抗體
?利于抗體純化：為成纖維細(xì)胞，非分泌型，本身很少分泌內(nèi)源性蛋白
?可用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
| 案例研究——兩步深層法除雜澄清料液
有一項(xiàng)目采用培養(yǎng)CHO-K1細(xì)胞作為宿主細(xì)胞來(lái)制備單克隆抗體。一般CHO-K1細(xì)胞發(fā)酵液內(nèi)容物較為復(fù)雜(濁度一般大于2000NTU)，除目標(biāo)產(chǎn)物外，還含有大量細(xì)胞碎片(如HCPs和DNA等)，一般采用離心后加一步深層或者兩步深層的方式進(jìn)行除雜澄清。
我們采用兩步深層的方式除雜澄清，其料液其結(jié)果如下表：
由上表可見(jiàn)，應(yīng)用LeClafine®對(duì)相關(guān)料液進(jìn)行過(guò)濾，有較好的除雜效果，且回收率也滿(mǎn)足客戶(hù)需求。
表1：一級(jí)過(guò)濾數(shù)據(jù)圖表
表2：二級(jí)過(guò)濾數(shù)據(jù)圖表
*本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)僅供參考，如有測(cè)試需求請(qǐng)聯(lián)系樂(lè)純生物技術(shù)支持部門(mén)。
除CHO-K1細(xì)胞外。目前深層濾器LeClafine®在293細(xì)胞、BHK細(xì)胞、MDCK細(xì)胞等發(fā)酵液及大腸桿菌裂解液的除雜澄清過(guò)程中均有應(yīng)用，將在后文中介紹。
樂(lè)純生物L(fēng)eClafine®深層過(guò)濾器
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在深層過(guò)濾產(chǎn)品應(yīng)用過(guò)程中還有哪些疑問(wèn)，歡迎您隨時(shí)聯(lián)系我們，若有想了解的有關(guān)深層過(guò)濾的知識(shí)，也歡迎留言區(qū)隨時(shí)留言，樂(lè)純生物技術(shù)團(tuán)隊(duì)會(huì)給您提供專(zhuān)業(yè)的解決方案。
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