研究人員普遍認(rèn)為實(shí)驗(yàn)室常用的塑料制品都有惰性，但有研究報(bào)道指出，諸如移液器吸頭和樣品管等常用實(shí)驗(yàn)耗材會(huì)浸出油酸酰胺、芥酸酰胺和DiHEMDA 等化合物。對(duì)于生化細(xì)胞分析和生物細(xì)胞分析而言，這是一個(gè)需要考慮的重要因素，因?yàn)榻龌衔飼?huì)對(duì)此類實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生抑制作用。
簡介
移液器吸頭用于實(shí)驗(yàn)室液體轉(zhuǎn)移應(yīng)用，包括取樣、培養(yǎng)基制備和稀釋等。但在標(biāo)準(zhǔn)操作過程中，移液器吸頭會(huì)釋放出生物活性污染物，對(duì)蛋白質(zhì)活性產(chǎn)生負(fù)面影響，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室常用的塑料制品會(huì)釋放出干擾性浸出物。
常見的遷移化合物包括油酰胺、芥酸酰胺、DiHEMDA DiHEMDA(雙(2- 羥乙基) 甲基十二烷基氯化銨)和bDtBPP(雙(2,4- 二叔丁基苯基) 磷酸酯)。
在本研究中，對(duì)賽多利斯Optifit 和Safetyspace® 濾芯吸頭及其低吸附型號(hào)使用無水乙醇及DMSO 萃取后采用HPLC、GC-MS和LC-MS法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室設(shè)備相關(guān)浸出物分析。
方法
實(shí)驗(yàn)室設(shè)備相關(guān)的浸出物測(cè)試使用100 μl 的乙醇或DMSO浸潤各種移液器吸頭(200 μl Optifit 吸頭、Safetyspace® 濾芯吸頭和低吸附型號(hào)，將溶劑吸入移液器吸頭，保持5 秒鐘并直接排液到樣品試管中。多個(gè)同型號(hào)移液器吸頭(5 個(gè)移液器吸頭，總共500 μL，混合樣品)用于生成足以使用GC-MS 或LC-MS 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室設(shè)備相關(guān)浸出物分析的檢測(cè)量。
GC-MS
通過液-液萃取制備乙醇和水提取物，并進(jìn)樣至色譜柱。通過使用內(nèi)標(biāo)2 - 氟聯(lián)苯(10 μg/ml)進(jìn)行液體注射，使用甲苯-d8(0.1μ g/ml)進(jìn)行頂空注射，進(jìn)行半定量。
LC-MS
將乙醇和DMSO 提取物直接進(jìn)樣至帶色譜柱的LC-MS 系統(tǒng)。通過目視比較樣品的基峰離子(BPI)色譜圖進(jìn)行評(píng)估。
結(jié)果
對(duì)賽多利斯Optifit 吸頭和Safetyspace® 濾芯吸頭及其低吸附型號(hào)進(jìn)行了GC-MS 和LC-MS 分析。
圖1. 使用GC-MS 對(duì)賽多利斯移液器吸頭無水乙醇萃取的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。
圖2.使用LC-HRMS(ESI+)對(duì)賽多利斯移液器吸頭無水乙醇萃取的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。
圖3.使用LC-HRMS(ESI-)對(duì)賽多利斯移液器吸頭DMSO萃取的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。
圖4.使用LC-MS(ESI+)對(duì)賽多利斯移液器吸頭無水乙醇萃取的化學(xué)浸出物進(jìn)行分析。
結(jié)論
從賽多利斯移液器吸頭中定量的浸出物水平低于文獻(xiàn)中報(bào)告的每種評(píng)估化合物的相關(guān)濃度(表1)。因此，在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室操作或生物分析樣品的制備中使用賽多利斯Optifit 吸頭和Safetyspace® 濾芯吸頭及其低吸附型號(hào)預(yù)計(jì)不會(huì)對(duì)敏感的生物或生化分析產(chǎn)生干擾。
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