體外診斷試劑的關(guān)鍵原料分為兩塊，一是抗原抗體，二是特殊成分?？乖贵w作為重要原料，影響整個試劑的核心質(zhì)量。在生產(chǎn)上，所用抗體一般通過重組抗原免疫動物來制備單克隆抗體或多克隆抗體，后進(jìn)行配對篩選應(yīng)用于免疫檢測。His(組氨酸)標(biāo)簽和GST(谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶)標(biāo)簽常用于重組抗原的表達(dá)純化的親和標(biāo)簽。
一 His標(biāo)簽
His標(biāo)簽由于其分子量小、與金屬離子結(jié)合能力強(qiáng)以及在變性條件下也可保持與介質(zhì)結(jié)合的特性，已成為常用的親和標(biāo)簽，Ni2+固定化金屬離子親和層析已成為純化組氨酸標(biāo)簽蛋白的標(biāo)準(zhǔn)方法。
對于His標(biāo)簽的重組抗原純化：
原理
1、His-Tag組氨酸的殘基上帶有1個咪唑基團(tuán)，可與多種金屬離子發(fā)生特殊的相互作用，如Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+，F(xiàn)e3+等，再用咪唑競爭洗脫，達(dá)到分離純化的效果。
2、Ni2+有六個螯合價位，被含有3,4或5個電子供體基團(tuán)的螯合物固定在吸附劑上；所以IDA與His標(biāo)簽蛋白結(jié)合的能力相對更強(qiáng)，特異性較弱，而TED則相反。
百林科Ni填料產(chǎn)品：
高流速：Ni Chromstar® FF(NTA)
Ni Chromstar® FF是純化組氨酸標(biāo)簽蛋白質(zhì)的首選，具有載量高、易再生、成本低等優(yōu)點。
高分辨率：Ni Chromstar® HP (NTA)
相比于 Ni Chromstar® FF，Ni Chromstar HP 具有更細(xì)的顆粒粒徑，提供更高的分辨率，可有效提升純化的蛋白純度和濃度。
高純度：Ni Chromstar® Excel
Ni Chromstar® Excel是百林科最新一代His標(biāo)簽親和填料，采用TED五價偶聯(lián)方式，Ni2+結(jié)合更牢固，不易脫落，一步純化純度可達(dá)到90%，具有明顯優(yōu)勢，當(dāng)然載量也會相應(yīng)降低。
Ni Chromstar® FF純化案例分享
實驗步驟：
Ni Chromstar® Excel與Ni Chromstar® FF純化對比：
由上圖可以看出，純化相同樣品，Ni Chromstar® Excel純度明顯高于Ni Chromstar® FF。
Ni Chromstar® Excel優(yōu)勢：
01 耐受100mM EDTA，簡化樣品前處理，無需換液操作。
02 可直接CIP，無需脫Ni，直接進(jìn)行0.1M或0.5M NaOH徹底清洗，有效避免交叉污染， 延長使用壽命。
03 Ni脫落率顯著降低，無需反復(fù)再生，使用保存更加方便。
二 GST標(biāo)簽
GST標(biāo)簽(分子量~26kDa)也是重組蛋白常用的標(biāo)簽，其具有良好的水溶性，常被用來表達(dá)水溶性不是特別好的蛋白，增加蛋白的可溶表達(dá)。通常使用Glutathione對GST標(biāo)簽進(jìn)行純化，可以獲得比使用His標(biāo)簽純化更好的純度，該標(biāo)簽的用途也非常廣泛。
原 理
利用層析填料上的還原型谷胱甘肽(GSH)可以與帶GST標(biāo)簽的重組蛋白特異性結(jié)合的性質(zhì)，將重組蛋白分離出來。
百林科GST親和純化層析填料產(chǎn)品：
1 高流速：Glutathione Chromstar® FF
Glutathione Chromstar® FF高流速特點適合后期工藝放大，由于GST標(biāo)簽純化原理是酶與底物的反應(yīng)，所以在使用過程中也要注意流速和結(jié)合效率的平衡。
2 高載量：Glutathione Chromstar® 4B
Glutathione Chromstar® 4B具有載量高的特點，此款填料可以有效提升弱結(jié)合蛋白與柱子的結(jié)合效率，可適用于弱結(jié)合蛋白。
3 高分辨率：Glutathione Chromstar® HP
Glutathione Chromstar® HP的平均粒徑約為34μm，分辨率高，所以洗脫的蛋白濃度和純度更高，同時需要注意細(xì)粒徑也會伴隨著背壓相對較高的特點。
GST標(biāo)簽親和純化案例[1-2]：
SDS-PAGE圖片來源：
[1] 麻粉蓮,張騫,鄭麗舒.人乳頭瘤病毒18型L1蛋白的包涵體和可溶性表達(dá)及純化[J].生物技術(shù)通訊,2014,25(06):800-803.
[2] 石松,薛殿婷,張培等.人MAPK3基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J].貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2021,46(10):1145-1150.DOI:10.19367/j.cnki.2096-8388.2021.10.005
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