從樣本到結(jié)果：非洲豬瘟核酸檢測(cè)儀工作原理解析@2024全國(guó)包郵JD-PCR08，山東競(jìng)道廠家介紹，非洲豬瘟(African Swine Fever, ASF)核酸檢測(cè)儀主要利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)對(duì)樣本中的病毒DNA進(jìn)行檢測(cè)。以下是從樣本到結(jié)果的工作原理解析：

　　1. 樣本準(zhǔn)備

　　樣本采集與處理：

　　采集：從豬只的血液、糞便或組織中采集樣本，確保樣本代表性和有效性。

　　處理：對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)處理，如離心、過濾和裂解，以提取病毒DNA。通常采用專用的樣品處理設(shè)備，確保樣品中的DNA被有效釋放和純化。

　　2. DNA提取

　　提取過程：

　　裂解樣本：使用裂解緩沖液破壞樣本中的細(xì)胞膜，釋放DNA。

　　純化：通過離心和柱純化技術(shù)去除蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，只保留純凈的DNA樣本。這一步驟通常在專用的自動(dòng)化提取設(shè)備中進(jìn)行，保證高效和一致性。

　　3. PCR擴(kuò)增

　　PCR反應(yīng)體系：

　　引物和探針：在PCR反應(yīng)中，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，這些引物與目標(biāo)病毒的DNA序列互補(bǔ)，確保特異性擴(kuò)增非洲豬瘟病毒的特定基因片段。

　　擴(kuò)增反應(yīng)：將提取的DNA與引物、探針和PCR反應(yīng)混合液放入PCR儀中。PCR儀通過循環(huán)加熱(變性)、降溫(退火)和中溫(延伸)三個(gè)階段，重復(fù)多次，使目標(biāo)DNA片段在每個(gè)循環(huán)中都進(jìn)行指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。

　　4. 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)

　　實(shí)時(shí)PCR(qPCR)：

　　熒光標(biāo)記：使用熒光染料或探針，結(jié)合在擴(kuò)增的DNA片段上。當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，熒光信號(hào)會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn)物的增加而增強(qiáng)。

　　數(shù)據(jù)收集：PCR儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化，通過熒光信號(hào)強(qiáng)度判斷DNA的量。軟件將這些數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為定量結(jié)果，并生成實(shí)時(shí)的擴(kuò)增曲線。

　　5. 結(jié)果分析

　　數(shù)據(jù)處理：

　　閾值設(shè)置：根據(jù)熒光信號(hào)的變化，設(shè)定一個(gè)閾值，以區(qū)分陽(yáng)性和陰性結(jié)果。陽(yáng)性結(jié)果表示樣本中含有非洲豬瘟病毒的DNA。

　　結(jié)果報(bào)告：軟件生成檢測(cè)結(jié)果報(bào)告，包括樣本是否為陽(yáng)性、病毒負(fù)荷量及其他相關(guān)數(shù)據(jù)。報(bào)告會(huì)提供清晰的結(jié)果解釋和建議措施。

　　總結(jié)

　　非洲豬瘟核酸檢測(cè)儀利用PCR技術(shù)通過樣本準(zhǔn)備、DNA提取、擴(kuò)增、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和結(jié)果分析的過程，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)樣本中是否含有非洲豬瘟病毒。實(shí)時(shí)PCR的高靈敏度和特異性使得該技術(shù)在早期檢測(cè)和快速診斷中具有重要作用。