上海撫生實業(yè)有限公司專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒，試劑盒，檢測試劑盒，人ELISA試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，ELISA試劑盒，ELISAKIT,兔子ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，狗ELISA試劑盒，豬ELISA試劑盒，倉鼠ELISA試劑盒，試劑盒，檢測試劑，抗體，細胞株，培養(yǎng)基，腫瘤壞死因子，白介素2，干擾素，標準品，對照品，生物試劑，標志物，抑制因子，抗原，瓊脂，細胞生長因子等。
　　
　　人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA檢測試劑盒
　　
　　試驗原理：
　　
　　NF-κB-P65試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知NF-κB-P65濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將NF-κB-P65和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中NF-κB-P65的濃度呈比例關(guān)系。
　　
　　自備材料
　　
　　蒸餾水。
　　
　　加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
　　
　　振蕩器及磁力攪拌器等。
　　
　　安全性
　　
　　避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
　　
　　實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
　　
　　不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
　　
　　人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA檢測試劑盒
　　
　　操作注意事項
　　
　　試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
　　
　　實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
　　
　　不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
　　
　　使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
　　
　　使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
　　
　　洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
　　
　　底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
　　
　　加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
　　
　　按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
　　
　　人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA檢測試劑盒
　　
　　樣品收集、處理及保存方法
　　
　　血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
　　
　　血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
　　
　　細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
　　
　　組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
　　
　　保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
　　
　　人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA檢測試劑盒
　　
　　操作步驟
　　
　　使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
　　
　　根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
　　
　　加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
　　
　　甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
　　
　　甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
　　
　　每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
　　
　　取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
　　
　　在450nm波長處測定各孔的OD值。
　　
　　局限
　　
　　6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。
　　
　　試劑盒性能
　　
　　1.靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
　　
　　2.特異性：不與人其它細胞因子反應(yīng)。
　　
　　3.重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
　　
　　人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA檢測試劑盒
　　
　　結(jié)果判斷與分析
　　
　　1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
　　
　　2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的NF-κB-P65標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的NF-κB-P65含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
　　
　　3、檢測值范圍：0-8.0umol/L
　　
　　4、敏感度：0.01umol/LPhospho-SHIP2（Tyr986/987）磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體0.1ml
　　
　　β-Actinβ-肌動蛋白抗體（內(nèi)參抗體）0.2ml
　　
　　β-Actinβ-肌動蛋白抗體（內(nèi)參抗體）0.1ml
　　
　　Phospho-SirT1（Ser47）磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體0.1ml
　　
　　phosphor-SMAD2（Ser425）磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導分子SMAD2抗體0.1ml
　　
　　Phospho-SMC1（Ser360）磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體0.1ml