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48T人多巴胺ELISA檢測試劑盒的試驗原理

來源:上海撫生實業(yè)有限公司   2013年01月28日 14:47  
  上海撫生實業(yè)有限公司專業(yè)供應(yīng)ELISA試劑盒,試劑盒,檢測試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,ELISA試劑盒,ELISAKIT,兔子ELISA試劑盒,豚鼠ELISA試劑盒,牛ELISA試劑盒,羊ELISA試劑盒,狗ELISA試劑盒,豬ELISA試劑盒,倉鼠ELISA試劑盒,試劑盒,檢測試劑,抗體,細(xì)胞株,培養(yǎng)基,腫瘤壞死因子,白介素2,干擾素,標(biāo)準(zhǔn)品,對照品,生物試劑,標(biāo)志物,抑制因子,抗原,瓊脂,細(xì)胞生長因子等。
  
  人多巴胺ELISA檢測試劑盒
  
  試驗原理:
  
  OCB試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知OCB濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將OCB和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中OCB的濃度呈比例關(guān)系。
  
  自備材料
  
  蒸餾水。
  
  加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
  
  振蕩器及磁力攪拌器等。
  
  安全性
  
  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
  
  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
  
  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
  
  人多巴胺ELISA檢測試劑盒
  
  操作注意事項
  
  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
  
  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
  
  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  
  使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
  
  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  
  洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
  
  底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
  
  加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
  
  按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
  
  人多巴胺ELISA檢測試劑盒
  
  樣品收集、處理及保存方法
  
  血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  
  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  
  細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  
  組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
  
  保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  
  人多巴胺ELISA檢測試劑盒
  
  操作步驟
  
  使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
  
  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
  
  加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
  
  甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  
  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
  
  甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
  
  每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
  
  取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
  
  在450nm波長處測定各孔的OD值。
  
  局限
  
  6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
  
  試劑盒性能
  
  1.靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
  
  2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
  
  3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
  
  人多巴胺ELISA檢測試劑盒
  
  結(jié)果判斷與分析
  
  1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
  
  2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的OCB標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的OCB含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。、
  
  3、檢測值范圍:0-400pg/ml
  
  4、敏感度:1.0pg/mlP19ARFp19ARF抑癌基因抗體0.1ml
  
  P19ARFp19ARF抑癌基因抗體0.2ml
  
  Mouseanti-goatIgG/PE熒光素PE標(biāo)記小鼠抗羊IgG0.1ml
  
  Mouseanti-goatIgM/PE熒光素PE標(biāo)記小鼠抗羊IgM0.1ml
  
  Mouseanti-humanIgG/PE熒光素PE標(biāo)記小鼠抗人IgG0.1ml
  
  Mouseanti-rabbitIgG/PE熒光素PE標(biāo)記熒光素PE標(biāo)記小鼠抗人IgG小鼠抗兔IgG0.1ml
  
  Mouseanti-ratIgG/PE熒光素PE標(biāo)記小鼠抗大鼠IgG0.1ml

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