革蘭氏染色及芽孢染色

一、實(shí)驗(yàn)原理

革蘭氏染色法的基本步驟是：先用初染劑結(jié)晶紫進(jìn)行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脫色，zui后用復(fù)染劑（如番紅）復(fù)染。經(jīng)此方法染色后，細(xì)胞保留初染劑藍(lán)紫色的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌；如果細(xì)胞中初染劑被脫色劑洗脫而使細(xì)菌染上復(fù)染劑的顏色（紅色），該菌屬于革蘭氏陰性菌。革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌重要的鑒別特征，為保證染色結(jié)果的正確性，采用規(guī)范的染色方法是十分必要的。 芽孢染色法的基本原理，用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當(dāng)用對(duì)比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，使芽孢和菌體更易于區(qū)分。

二、試劑與器材

1、材料：枯草芽孢桿菌12～18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，大腸桿菌約24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物

2、試劑 革蘭氏染色液（結(jié)晶紫液、碘液、95％乙醇、番紅液）。5％孔雀綠水溶液

3、實(shí)驗(yàn)器材 小試管、滴管、燒杯、試管架、濾紙、木夾子、載玻片、蓋玻片、凹載玻片、無菌水、顯微鏡等、接種環(huán)、雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯）、擦鏡紙、生理鹽水等。

三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、革蘭氏染色法 制片→初染→媒染→脫色→復(fù)染→鏡檢。

2、Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→復(fù)染→水洗→鏡檢。

四、關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)

1、涂片時(shí)，生理鹽水及取菌不宜過多，涂片應(yīng)盡可能均勻，

2、乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，嚴(yán)格掌握脫色時(shí)間。