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齊一生物人血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)檢測試劑盒工作液準備
7.1 AFB1標準品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
7.3 樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
7.3 顯色劑:已備用,避免光線直照
7.4 反應(yīng)終止液:已備用
8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準確稀釋,否則會出現(xiàn)結(jié)果不準確,樣品應(yīng)當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取100μl處理后的樣品,加入400μl樣本稀釋液
8.5取50μl稀釋液進行分析(稀釋倍數(shù)10)
9 酶免分析步驟
9.1 實驗須知
9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)室溫(25±2℃),時間約2小時?;販厥覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。
9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3 請不要改變分析程序
9.1.4 請使用精確的微量移液器
9.1.5 操作一旦開始,請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作
9.1.7 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
9.2 分析步驟
9.2.1 預(yù)先進行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測
9.2.2 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗本產(chǎn)品抗體酶結(jié)合物
9.2.8 輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)
9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
9.4 反應(yīng)
9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻
9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取Pierce PA129634 Rat IgG Fab fragment (Biotin) 500 μg
Pierce PA129639 DR5 50 μg
Pierce PA129640 Angiopoietin 2 100 μl
Pierce PA129653 GSF3 50 μg
Pierce PA129657 LIX 100 μg
Pierce PA129662 beta 2 Microglobulin (HRP) 250 μg
Pierce PA129668 MAGE 1 50 μg
Pierce PA129677 Tet Repressor 100 μg
Pierce PA129680 Lysozyme 500 μl
Pierce PA129715 C3 1 ml
Pierce PA129718 C3c (FITC) 1 ml
Pierce PA129720 C1q 1 ml
Pierce PA129725 NFY 50 μg
Pierce PA129726 RBL2 50 μl
Pierce PA129737 p450 control 100 μl
Pierce PA129738 Dog IgG H&L (HRP) 500 μg
Pierce PA129740 Haptoglobin 100 μg
Pierce PA129741 Mouse IgA 500 μg
Pierce PA129751 Pierce(R) Anti-HA (HRP) RabbitPolyclonal Antibody, 100 ug 100 μg
Pierce PA129768 Orphanin FQ 50 μl
Pierce PA129769 P2X3 50 μl
Pierce PA129770 VR1 50 μl
Pierce PA129771 CCR4 50 μg
Pierce PA129778 Lymphotactin 50 μg
Pierce PA129780 EphA6 50 μg
Pierce PA129783 EphB6 50 μg
Pierce PA129786 TRPC6 50 μl
Pierce PA129791 Dicer 100 μg
Pierce PA129792 POR 50 μl
Pierce PA129793 Bcl2L2 50 μg
Pierce PA129794 HSPE1/Cpn10 100 μl
Pierce PA129797 MBD1 100 μg
Pierce PA129799 INHAT1 200 μl
Pierce PA129801 TRF41 100 μg
Pierce PA129807 Puma gamma 200 μl
Pierce PA129808 DUT-N 100 μg
Pierce PA129809 APEX2 200 μl
Pierce PA129811 Porimin 200 μl
Pierce PA129812 SIRT5 100 μg
Pierce PA129815 Ligase 1 200 μl
Pierce PA129817 Bcl3 200 μl
Pierce PA129818 TNFRSF12A 200 μl
Pierce PA129820 ASB11 100 μg
Pierce PA129823 ASB3 100 μg
Pierce PA129824 RISC 100 μg
Pierce PA129825 SIGIRR 200 μl
Pierce PA129826 SMAD8 100 μl
Pierce PA129829 SMAD6 200 μl
Pierce PA129830 SET7 /SET9 200 μl
Pierce PA129834 TBLR1 100 μg
Pierce PA129840 TXNDC5 100 μg
Pierce PA129841 NUR77 200 μl
Pierce PA129843 IL-21-R 200 μl