齊一生物現(xiàn)貨膽固醇(CH)試劑盒Elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法.由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中.全國:
齊一生物現(xiàn)貨膽固醇(CH)試劑盒操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
注:
1. 用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
2. 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值零。
3. 為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液或、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計(jì)算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時,請以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請避光保存。
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
1kb DNA Ladder, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
1kb DNA Ladder DNA Marker P, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
2500bp DNA Fragment 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
DNA Marker C, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
15bp DNA Fragment 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
75bp DNA Fragment 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
400bp DNA Fragment 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
PhiX174 DNA/ BsuRI (HaeIII) Marker, 9 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
100 +2 +3kb DNA Ladder-M, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
DNA Marker E, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
DNA Marker E, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
35bp DNA Fragment 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? Mix 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Pretained SDS-PAGE standards (Low range) 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
SpectraTM Multicolor Low Range Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
PageRulerTM Unstained Low Range Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pBR322 DNA/ AluI Marker, 20 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pBR322 DNA/ AluI Marker, 20,Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pUC19 DNA/ MspI (HpaII) Marker, 23 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pUC19 DNA/ MspI (HpaII) Marker, 23 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? Mix 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? Mix, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
RiboRuler? RNA Ladder, Low Range 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
RiboRuler? RNA Ladder, Low Range, 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
RiboRuler? RNA Ladder, High Range 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? Ultra Low Range Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Pretained SDS-PAGE standards (Mid range) 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
SpectraTM Multicolor Broad Range Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
PageRulerTM Unstained Broad Range Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Rainbow protein standards (Broad range) 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
SpectraTM Multicolor Broad Range Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
SpectraTM Multicolor High Range Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
PageRulerTM Plus Prestained Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
PageRulerTM Prestained Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
PageRulerTM Prestained Protein Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Prestained Protein Molecular Weight Marker 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Protein marker, Low Range 低范圍分子量馬克
Protein Marker, Mid Range, ready to use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Protein Marker, Mid Range, ready to use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Protein Molecular Weight Marker 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
FastRuler? Ultra Low Range DNA Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
FastRuler? Low Range DNA Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
FastRuler?Middle Range DNA Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 5bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 10bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 20bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 50bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
100 +1.5 +3kb DNA Ladder-L, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 200bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 500bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'RangeRuler? 100 + 500bp DNA Ladder, ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/EcoRI Marker, 1 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/HindIII Marker, 2 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/HindIII Marker, 2 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/HindIII Marker, 2 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/HindIII Marker, 2, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/EcoRI+HindIII Marker, 3 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/EcoRI+HindIII Marker, 3 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/EcoRI+HindIII Marker, 3,Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda – Puc Mix Marker, 4 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/Eco91I (BstEII) Marker, 15 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/Eco130I (StyI) Marker, 16 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda Mix Marker, 19 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
Lambda DNA/PstI Marker, 24 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pUC Mix Marker, 8 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pUC Mix Marker, 8 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
pUC Mix Marker, 8,Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? 1kb 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? Ultra Low Range Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? 1kb Plus, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? 1kb Plus, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
GeneRuler? Low Range Ladder 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克
O'GeneRuler?Low Range Ladder, Ready-to-use 標(biāo)準(zhǔn)分子量馬克