T4 DNA連接酶T4 DNA Ligase英文名稱:T4 DNA Ligase
CAS號:9015-85-4
分子量:55.3kDa,單體
級別:BR
來源:含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
活性定義:是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中,37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量(weiss單位,1個weiss單位相當于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位:20ul反應(yīng)體系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量)
抑制劑:當反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時,可強烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活:65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
T4 DNA連接酶T4 DNA Ligase注意:T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,為避免此現(xiàn)象,電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下:樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存;轉(zhuǎn)化時,連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細胞體積中的10%;電轉(zhuǎn)化之前,先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase,然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
質(zhì)量控制:測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測:粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀(以下信息僅供參考):液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復合體中的單鏈切口,連接DNA的粘性和平末端,但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途:本品僅供科研,不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接;雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接;雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復合體中缺口的修復;連接酶介導的RNA檢測;位點特異性突變;擴增片段長度多態(tài)性
保存: -20°C
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