活性檢測(cè)CCK-8細(xì)胞毒性與增殖檢測(cè)試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan，參考圖1)。WST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1：WST-8分子結(jié)構(gòu)及檢測(cè)原理

運(yùn)輸與保存方法:

冰袋運(yùn)輸。CCK-8在4℃可保存一年，在-20℃可以存放數(shù)年，反復(fù)凍融會(huì)造成測(cè)定背景O.D值升高，如經(jīng)常使用，建議存放于4℃即可。

操作方法:

1. 在96孔板中配制100 μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí) (在37℃，5% CO2的條件下)。

2. 向培養(yǎng)板加入10 μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。如果測(cè)定細(xì)胞活性，則不需要2-3步驟，直接從第四步操作。

3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,  12, 24或48小時(shí))。

4. 向每孔加入10 μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù))。

5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

6. 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。

注意事項(xiàng):

1）CCK-8試劑盒的檢測(cè)依賴于脫氫酶催化反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會(huì)造成背景O.D值升高，干擾檢測(cè)結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，請(qǐng)檢查背景的O.D值，即測(cè)定、比較空白培養(yǎng)基加入藥物與不加藥物的培養(yǎng)基（含細(xì)胞）在加入CCK- 8試劑后的O.D值，如果空白O.D值明顯偏高，則說(shuō)明有反應(yīng)，應(yīng)設(shè)法去除或折算干擾因素。

2）如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測(cè)定結(jié)果。

3）為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑，混勻后加樣。

4）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 CCK-8與同類試劑比較