多肽保存
多肽一般*保存需要避光保存,并應(yīng)保存在-20度以下,-80°C效果更好,短期可以保存在4℃??梢远虝r(shí)間以室溫運(yùn)輸。多肽在-20℃或更低溫度很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中時(shí)。
在打開包裝和稱重前,請(qǐng)先將多肽在干燥器中平衡至室溫,未經(jīng)平衡到室溫的多肽在打開蓋子后易有水份凝結(jié),會(huì)降低了多肽產(chǎn)品的穩(wěn)定性。
含有Cys, Met or Trp的多肽容易氧化,脫氧緩沖劑對(duì)其溶解*,因?yàn)檫@種多肽容易空氣氧化, 在封瓶前,氮?dú)饣驓鍤獗Wo(hù)會(huì)降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽比較容易降解,所有這些肽與不含這些有問(wèn)題的簡(jiǎn)單肽相比,保存期要短。
對(duì)N端*個(gè)氨基酸是Gln的的多肽非常不穩(wěn)定,幾天內(nèi)會(huì)發(fā)生降解,建議在設(shè)計(jì)序列時(shí),不讓Gln在N端出現(xiàn)。
定制的多肽能保證多肽在特定溶液中的溶解性嗎?
我們無(wú)法通過(guò)研究多肽的結(jié)構(gòu)來(lái)預(yù)測(cè)其在水中的溶解度。我們不能保證終產(chǎn)品在水中,或者其他溶劑中的溶解性。
然而,賴氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于預(yù)測(cè)溶解度,尤其是短肽。與此相反,含有天門冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的,但易溶于稀氨水或堿性緩沖液。
如果訂購(gòu)多肽超過(guò)10mg 的話,國(guó)肽生物可以測(cè)試室溫條件下1mg多肽在0.5~1ml DMF,水中的溶解情況
定制多肽的活性能保證嗎?
定制多肽的活性受多個(gè)因素的影響。國(guó)肽生物能保證的是產(chǎn)品的序列正確 (Mass 結(jié)果保證),純度達(dá)標(biāo)(HPLC 結(jié)果保證)。對(duì)于活性,由于沒有專門的測(cè)試方法,所以不能保證。
有幾個(gè)因素可能對(duì)確?;钚杂兴鶐椭?/span>
A.一般完工的定制多肽為TFA 鹽形式,如果客戶需要研究多肽的電荷等情況,需要要求將多肽脫鹽。
B.一般完工的定制多肽為TFA 鹽形式, 有的客戶會(huì)要求將其轉(zhuǎn)為醋酸鹽。
國(guó)肽生物對(duì)合成的多肽提供分裝服務(wù)嗎?
根據(jù)要求,本公司每個(gè)樣品可以在10管以內(nèi)免費(fèi)分裝,如果需要分裝更多管數(shù),超過(guò)10管部分,每管加收8元。由于少量分裝可以避免多次反復(fù)凍融,減少容器的開蓋和閉合的次數(shù),減少處理不當(dāng)或細(xì)菌污染的機(jī)會(huì),讓您的多肽更加穩(wěn)定。
國(guó)肽生物如何對(duì)合成的多肽進(jìn)行質(zhì)檢?
產(chǎn)品將附完整的檢測(cè)報(bào)告,包括:HPLC圖譜;質(zhì)譜;合成報(bào)告(COA)。
(如有特殊需要,可提供核磁,紅外,紫外,元素分析,水分含量測(cè)定以及氨基酸分析服務(wù),這些服務(wù)需要另外收費(fèi))
多肽的純度(HPLC)及多肽含量(Peptide Content)
多肽的純度(HPLC)及多肽含量(Peptide Content)意義不同,訂購(gòu)多肽之前需要明確。
案例:1g 多肽 HPLC 98% 純度,80% 多肽含量,水含量10%,TFA含量10%
稱重:1g
多肽部分:800mg 【其中784mg 是目的多肽(多肽部分的 98%),16mg 是其他肽雜質(zhì) (多肽部分的2%)】
水部分:100mg
鹽部分: TFA 100mg
一般訂購(gòu)多肽純度指標(biāo),指的是HPLC純度。
具體解釋:
多肽的純度是指HPLC方法在220nm處檢測(cè)到的目標(biāo)多肽的含量(220nm是肽鏈的吸收波長(zhǎng)),紫外分光光度計(jì)檢測(cè)不到水和殘留的鹽不??砂l(fā)現(xiàn)其他的雜質(zhì)包括:缺失序列(缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列),截?cái)嘈蛄?加帽過(guò)程中產(chǎn)生的序列)脫保護(hù)不*序列(產(chǎn)生于整個(gè)合成過(guò)程或后的裂解過(guò)程)。
多肽純化不涉及水和鹽。HPLC純化會(huì)產(chǎn)生少量的TFA(三),如:游離的氨基末端和其他側(cè)鏈如Arg、Lys、His都可生成少量TFA雜質(zhì)。通常交付的多肽多含有微量TFA和殘留水。即使處于凍干狀態(tài),水也會(huì)因共價(jià)結(jié)合的能力不同而不同程度地存在著。
純化前的多肽中包含的雜質(zhì)包括多肽和非多肽物質(zhì), 純化后的多肽中包含的雜質(zhì)除了TFA鹽,大多數(shù)為序列被修改的多肽。
a.缺失了一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的靶序列
b.為避免缺失序列的產(chǎn)生而進(jìn)行的加帽操作,截?cái)嘈蛄屑串a(chǎn)生于加帽過(guò)程中
c.產(chǎn)生于整個(gè)合成過(guò)程或后的裂解過(guò)程
d.保護(hù)基重新附著在多肽的其他位置
如果對(duì)鹽有特殊要求,請(qǐng)?jiān)谠儍r(jià)時(shí),明確一下(脫鹽,轉(zhuǎn)成醋酸鹽 等)。如果不注明,做成的多肽都是TFA(三)鹽形式。
注意,國(guó)肽生物使用的HPLC 測(cè)試體系如下:
Solvent A:0.1%Trifluoroacetic in * Acetonirile
Solvent B:0.1%Trifluoroacetic in * Water
Flow rate:1.0ml/min
Wavelength:220nm
色譜柱:C18 反相柱
如果您有特殊的分析條件(色譜條件),請(qǐng)?jiān)谟嗁?gòu)之前告知,我們將和商討。如果您沒有特殊要求,我們的測(cè)試條件就是上述常用的體系。
多肽含量(Peptide Content)是指與非肽物質(zhì)(主要為抗衡離子和水)相比的多肽量。可通過(guò)氨基酸分析來(lái)確定肽凈含量。如果您需要這項(xiàng)服務(wù)請(qǐng)?jiān)谟唵紊厦鞔_。
一個(gè)肽段是否可溶能預(yù)測(cè)嗎?
我們無(wú)法通過(guò)研究多肽的結(jié)構(gòu)來(lái)預(yù)測(cè)其在水中的溶解度。我們不能保證終產(chǎn)品在水中,或者其他溶劑中的溶解性。
然而,賴氨酸的ε-氨基和精氨酸的胍通常有助于預(yù)測(cè)溶解度,尤其是短肽。與此相反,含有天門冬氨酸和谷氨酸的酸性肽往往是不易溶于水的,但易溶于稀氨水或堿性緩沖液。
多肽溶解
溶解多肽是非常復(fù)雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點(diǎn)試驗(yàn),在沒有確定合適的溶劑前千萬(wàn)不要全部溶解。
下列方法有助于您選擇合適的溶劑:
(1) 判定多肽的電荷特定,設(shè)定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其它氨基酸的電荷為0。計(jì)算出將電荷數(shù)。
(2) 如果凈電荷數(shù)>0,多肽為堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(3) 如果凈電荷數(shù)<0,多肽為酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(4) 如果凈電荷數(shù)=0,多肽為中性,含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有機(jī)溶劑中,如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇,然后加水(蒸餾水)稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解,因?yàn)镈MSO可能造成側(cè)鏈氧化。還有人建議需要尿素來(lái)溶解。對(duì)于含有自由半胱氨酸的肽,需使用DMF而不是DMSO。對(duì)于疏水性很大的多肽,可添加6M鹽酸胍或8M尿素,然后進(jìn)行必要的稀釋。
為了防止或盡量減少多肽降解,請(qǐng)將多肽以凍干粉形式保存在-20°C或更低溫度更佳。如果需要保存溶液肽,好分成小樣存放,以避免反復(fù)凍融。一份樣品融凍后未用完,應(yīng)扔掉。細(xì)菌降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩,所以請(qǐng)將肽溶于無(wú)菌水或肽溶液過(guò)濾除菌。
堿性氨基酸:Lys(K), Arg(R), His (H) , Orn
酸性氨基酸: Asp(D), Glu(E),
如何在國(guó)肽生物訂購(gòu)多肽?
請(qǐng)將您所需多肽名稱、序列、純度、量要求,
國(guó)肽生物主要提供:多肽合成、多肽定制、同位素標(biāo)記肽、人工胰島素、磷酸肽、生物素標(biāo)記肽、熒光標(biāo)記肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目錄肽、偶聯(lián)蛋白(KLH、BSA、OVA等)、美容肽、化妝品肽、多肽文庫(kù)構(gòu)建、抗體服務(wù)、糖肽、訂書肽、藥物肽、RGD環(huán)肽等。詳情請(qǐng)咨詢國(guó)肽生物
關(guān)注國(guó)肽生物科技