利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)抗炎作用—神經(jīng)性炎癥【評(píng)價(jià)原理】
炎癥是免疫系統(tǒng)對(duì)組織損傷和感染的一種反應(yīng)，主要特點(diǎn)就是白細(xì)胞（粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）會(huì)聚集在感染組織周圍。斑馬魚(yú)的免疫系統(tǒng)非常類似于哺乳動(dòng)物。創(chuàng)傷發(fā)生時(shí)，中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞對(duì)創(chuàng)傷性炎癥幾乎同時(shí)作出應(yīng)答，中性粒細(xì)胞遷移速度快，先募集到損傷部位，隨后巨噬細(xì)胞才到達(dá)。數(shù)小時(shí)后，炎癥開(kāi)始消退，巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞離開(kāi)損傷部位。硫酸銅損傷斑馬魚(yú)神經(jīng)丘（斑馬魚(yú)體表側(cè)線器的末稍器官），造成神經(jīng)丘細(xì)胞死亡，斑魚(yú)的中性粒細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答，聚集在神經(jīng)丘周圍，吞噬死亡的細(xì)胞 。
采用轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞熒光魚(yú)（呈綠色），可在熒光顯微鏡在觀察到斑馬魚(yú)體表側(cè)線上的中性粒細(xì)胞比正常斑馬魚(yú)明顯增多。
利用斑馬魚(yú)模型評(píng)價(jià)抗炎作用—神經(jīng)性炎癥【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測(cè)試斑馬魚(yú)分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和服用抗炎藥組。其中正常對(duì)照組未攝入硫酸銅，模型對(duì)照組和服用/注射抗炎藥組均攝入硫酸銅（硫酸銅通過(guò)溶解到養(yǎng)魚(yú)用水中的方式攝入到斑馬魚(yú)體內(nèi)）。服用/注射抗炎藥組在攝入硫酸銅之前攝入吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和雙氯芬酸之類的抗炎藥。
服用一段時(shí)間抗炎藥后，我們觀察斑馬魚(yú)體表側(cè)線上的中性粒細(xì)胞數(shù)量，并通過(guò)Q-PCR檢測(cè)TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎癥相關(guān)因子的表達(dá)。
【結(jié)果展示】
圖1. 斑馬魚(yú)體表側(cè)線上中性粒細(xì)胞表型圖
黃色箭頭所指為中性粒細(xì)胞
可以看到，服用/注射抗炎藥組側(cè)線上中性粒細(xì)胞與正常對(duì)照組相似，未出現(xiàn)中性粒細(xì)胞募集情況。
以IL-1β基因?yàn)槔?，提供柱狀圖。
圖2. 斑馬魚(yú)IL-1β基因相對(duì)表達(dá)量
與模型對(duì)照組比較，**p < 0.01
可以看到，服用/注射抗炎藥組斑馬魚(yú)與模型對(duì)照組比較，IL-1β基因表達(dá)明顯下調(diào)。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過(guò)每組30尾斑馬魚(yú)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用抗炎藥組側(cè)線上中性粒細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組數(shù)量相當(dāng)，未出現(xiàn)模型對(duì)照組中性粒細(xì)胞募集情況，且TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎癥因子明顯下調(diào)。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了吲哚美辛、阿司匹林、布洛芬和雙氯芬酸具有顯著的抗炎作用，且抑制TNF-α、COX-2、IL-1β、IL-6和IL-10炎癥相關(guān)因子的表達(dá)。
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