利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)保護(hù)腎臟功效

利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)保護(hù)腎臟功效【評(píng)價(jià)原理】

腎臟是人體的重要器官,,發(fā)揮著從血液中濾過(guò)代謝廢物并維持體內(nèi)正常酸堿和滲透壓平衡的重要作用。斑馬魚的腎臟與哺乳動(dòng)物腎臟的發(fā)育及疾病的發(fā)生、發(fā)展存在很多相似之處，涉及的許多基因具有高度保守性。因此，斑馬魚適合用于評(píng)價(jià)保護(hù)腎臟功效。馬兜鈴酸主要損傷腎小管上皮細(xì)胞，導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維，并出現(xiàn)低分子蛋白尿、嚴(yán)重貧血癥狀，被稱為“馬兜鈴酸病”。在人體和斑馬魚上，馬兜鈴酸均可誘發(fā)腎性水腫和腎臟形態(tài)功能異常，引起不可逆性腎損傷并至死亡。

評(píng)價(jià)保護(hù)腎臟功效有兩個(gè)指標(biāo)：1. 腎性水腫發(fā)生率。由于斑馬魚通體透明，腎性水腫可以明顯的被觀察到。2. 腎小球?yàn)V過(guò)率。通過(guò)注射熒光物質(zhì)，正常斑馬魚可將熒光物質(zhì)排出體外，腎小球?yàn)V過(guò)功能損傷的斑馬魚不能將熒光物質(zhì)排出體外。觀察斑馬魚全身熒光強(qiáng)度可分析腎小球?yàn)V過(guò)率。

利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)保護(hù)腎臟功效【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測(cè)試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和腎保護(hù)劑組。其中正常對(duì)照組未攝入馬兜鈴酸，模型對(duì)照組和腎保護(hù)劑組都攝入了等量的馬兜鈴酸（馬兜鈴酸通過(guò)溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。腎保護(hù)劑組在攝入馬兜鈴酸的同時(shí)攝入山牡荊水提取物之類的腎保護(hù)劑。檢測(cè)腎小球?yàn)V過(guò)率的斑馬魚在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需額外靜脈注射熒光物質(zhì)。

服用一段時(shí)間腎保護(hù)劑后，1.統(tǒng)計(jì)斑馬魚腎性水腫的發(fā)生率，2.用熒光顯微鏡拍照，通過(guò)斑馬魚全身熒光強(qiáng)度分析腎小球?yàn)V過(guò)率。

【結(jié)果展示】

圖1. 腎性水腫表型圖

紅色箭頭指向腎性水腫

可以看到，腎保護(hù)劑組與正常對(duì)照組比較相似，無(wú)明顯的腎性水腫。

圖2. 斑馬魚腎小球?yàn)V過(guò)率評(píng)價(jià)表型圖

紅色代表未排出體外的熒光物質(zhì)

可以看到，腎保護(hù)劑組可以增加斑馬魚腎小球?yàn)V過(guò)率，顯示為熒光強(qiáng)度比模型對(duì)照組弱。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過(guò)每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，腎保護(hù)劑組斑馬魚與未攝入馬兜鈴酸的正常對(duì)照組相似，腎性水腫發(fā)生率與模型對(duì)照組相比減少，腎保護(hù)劑組斑馬魚腎小球?yàn)V過(guò)率與模型對(duì)照組相比增加，未出現(xiàn)模型對(duì)照組腎臟損傷的情況。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了山牡荊水提取物具有明顯的保護(hù)腎臟功效。