利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松癥治療劑

利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松癥治療劑【評(píng)價(jià)原理】

潑尼松是糖皮質(zhì)激素的一種常用制劑，糖皮質(zhì)激素由于其抗炎和免疫抑制作用，在臨床上得到廣泛運(yùn)用。皮質(zhì)類固醇治療過(guò)程中引起骨保護(hù)素(OPG)與核因子KB受體激活因子(RANK)配體(RANKL)之間的比例發(fā)生改變，導(dǎo)致在前3～6個(gè)月時(shí)骨吸收增加，使其發(fā)生骨質(zhì)疏松并增加骨折的風(fēng)險(xiǎn)的不良反應(yīng)。鈣黃綠素是一種特異性的熒光染料，可與鈣化的骨結(jié)構(gòu)進(jìn)行特異性結(jié)合。故在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，用鈣黃綠素工作液對(duì)斑馬魚進(jìn)行染色，并置于熒光顯微鏡下觀察，可觀察到骨質(zhì)疏松的斑馬魚脊椎骨熒光強(qiáng)度，比正常對(duì)照組斑馬魚弱很多。

我們?cè)u(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松癥有2個(gè)指標(biāo)：1. 骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）表達(dá)水平；2. 骨密度（熒光信號(hào)強(qiáng)度）。

利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松癥治療劑【實(shí)驗(yàn)方案】

我們將受測(cè)試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和增加骨密度藥物組。其中正常對(duì)照組未加潑尼松，模型對(duì)照組與增加骨密度藥物組都加入了等量的潑尼松（潑尼松通過(guò)溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用治療骨質(zhì)疏松藥物組在加入潑尼松的同時(shí)加入依替膦酸二鈉、特立帕肽之類的治療骨質(zhì)疏松的藥物。服用藥物后一段時(shí)間后，在顯微鏡下觀察斑馬魚脊椎骨熒光強(qiáng)度同時(shí)測(cè)定基因的表達(dá)量。

【結(jié)果展示】

圖1. 斑馬魚脊椎骨熒光表型圖

框內(nèi)為定量的脊椎骨

可以看到，服用治療骨質(zhì)疏松藥物組的斑馬魚脊椎骨表型與未加入潑尼松的正常對(duì)照組比較相似，與模型對(duì)照組比較熒光信號(hào)明顯增強(qiáng)，說(shuō)明斑馬魚的骨密度有所恢復(fù)。

【評(píng)價(jià)結(jié)論】

1.經(jīng)過(guò)每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用治療骨質(zhì)疏松藥物組的脊椎骨熒光強(qiáng)度與模型對(duì)照組比較明顯增強(qiáng)，骨密度有所恢復(fù)；骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）表達(dá)量明顯上調(diào)。

2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了依替膦酸二鈉、特立帕肽等治療骨質(zhì)疏松的藥物具有增強(qiáng)骨密度的功效。