利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)帕金森病防治作用【評(píng)價(jià)原理】
帕金森病是一種影響運(yùn)動(dòng)能力的退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，一般認(rèn)為與黑質(zhì)紋狀體的多巴胺能通路破壞有關(guān)。中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元大量死亡可導(dǎo)致多巴胺減少，不能正常傳遞運(yùn)動(dòng)信號(hào)，乙酰膽堿功能也相對(duì)增強(qiáng)，導(dǎo)致帕金森患者出現(xiàn)靜止性震顫和肌肉僵直等典型的運(yùn)動(dòng)癥狀。斑馬魚由于體積小、胚胎和早期幼魚透明、神經(jīng)系統(tǒng)在胚胎發(fā)育4天時(shí)就已發(fā)育成熟，在胚胎時(shí)期就能觀察到完整的中樞神經(jīng)系統(tǒng)。斑馬魚胚胎透明，能觀察到多巴胺長投射纖維在腦和脊髓的分布，對(duì)帕金森病的發(fā)病機(jī)制研究有重要作用。6-OHDA是一種能有效導(dǎo)致多巴胺神經(jīng)元變性的神經(jīng)毒劑，廣泛用于動(dòng)物帕金森模型。諾米芬辛是4一氫異喹啉衍化的三環(huán)類化合物，它抑制多巴胺及NA的攝取，主要是通過抑制多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì)生物體起作用。
經(jīng)過行為學(xué)分析儀，患有帕金森病的斑馬魚的運(yùn)動(dòng)距離明顯減少；經(jīng)過免疫組化染色，患有帕金森病的斑馬魚多巴胺神經(jīng)元面積明顯減少。
利用斑馬魚模型評(píng)價(jià)帕金森病防治作用【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測(cè)試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和服用帕金森病治療藥物組。其中正常對(duì)照組未經(jīng)任何處理，模型對(duì)照組與陽性對(duì)照組都攝入了等量的6-OHDA（6-OHDA通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。帕金森病治療藥物組在攝入6-OHDA的同時(shí)攝入諾米芬新之類的帕金森治療藥物。
服用一段時(shí)間帕金森治療藥物后，我們用行為學(xué)分析儀測(cè)定斑馬魚的運(yùn)動(dòng)總距離，并對(duì)斑馬魚體內(nèi)多巴胺神經(jīng)元進(jìn)行免疫組化染色，分析多巴胺神經(jīng)元面積變化。
【結(jié)果展示】
圖1. 各實(shí)驗(yàn)組斑馬魚運(yùn)動(dòng)總運(yùn)動(dòng)距離
與模型對(duì)照組比較，*p< 0.05
可以看到，模型對(duì)照組斑馬魚的運(yùn)動(dòng)總距離與正常對(duì)照組相比明顯減少，帕金森病治療藥物組的運(yùn)動(dòng)總距離與正常對(duì)照組較相似，沒有明顯的減少。
圖2. 帕金森病多巴胺神經(jīng)元免疫組化染色
黃色區(qū)域?yàn)槎繀^(qū)域
可以看到，模型對(duì)照組的多巴胺神經(jīng)元面積與正常對(duì)照組相比明顯減小，帕金森病治療藥物組的多巴胺神經(jīng)元面積與正常對(duì)照組比較相似，沒有明顯的減小。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用帕金森病治療藥物組的運(yùn)動(dòng)總距離、多巴胺神經(jīng)元面積與正常對(duì)照組相似，并未出現(xiàn)模型對(duì)照組運(yùn)動(dòng)總距離明顯減少和多巴胺神經(jīng)元面積明顯減小的情況。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了諾米芬新具有防治帕金森病的作用。
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