斑馬魚模型評(píng)價(jià)血液毒性【評(píng)價(jià)原理】
斑馬魚作為一種理想的人類血液毒性模型，是以其造血系統(tǒng)與人類造血系統(tǒng)在進(jìn)化上高度保守性尾前提的。通過與人類造血類似的信號(hào)傳導(dǎo)通路，斑馬魚形成了以包括紅系、髓系、淋系及巨核系為主的造血系統(tǒng)。斑馬魚可建立多種血液系統(tǒng)毒性模型，主要包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、出凝血障礙性毒性三大類，因此主要與斑馬魚中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、紅細(xì)胞和血流量相關(guān)。由于斑馬魚具有身體積小、實(shí)驗(yàn)周期短等優(yōu)點(diǎn)，可以用作評(píng)估血液毒性的一種便捷模型。
轉(zhuǎn)基因中性粒細(xì)胞綠色熒光斑馬魚中性粒細(xì)胞自身發(fā)出熒光，可以直接在熒光顯微鏡下觀察中性粒細(xì)胞個(gè)數(shù)；黑色素等位基因突變斑馬魚通體透明，經(jīng)過巨噬細(xì)胞染色后可以直接在顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞數(shù)量；利用鄰聯(lián)茴香胺將斑馬魚心臟紅細(xì)胞染色，在顯微鏡下可以直接觀察紅細(xì)胞數(shù)量（信號(hào)強(qiáng)度）。
斑馬魚模型評(píng)價(jià)血液毒性【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測(cè)試斑馬魚分成兩組，分別是正常對(duì)照組和供試品組(供試品通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi))。
處理結(jié)束后，(1)通過熒光顯微鏡觀察并統(tǒng)計(jì)斑馬魚中性粒細(xì)胞數(shù)量；(2)通過染色斑馬魚巨噬觀察巨噬細(xì)胞細(xì)胞數(shù)量；(3)通過鄰聯(lián)茴香胺染色心臟部位紅細(xì)胞，在顯微鏡下觀察心臟紅細(xì)胞染色強(qiáng)度。
【結(jié)果展示】
圖1.斑馬魚中性粒細(xì)胞表型圖
（綠色小點(diǎn)為中性粒細(xì)胞）
可以看到，供試品組中性粒細(xì)胞個(gè)數(shù)較正常對(duì)照組明顯減少。
圖2.斑馬魚巨噬細(xì)胞表型圖
（紅色小點(diǎn)為巨噬細(xì)胞）
可以看到，供試品組巨噬細(xì)胞數(shù)量較正常對(duì)照組明顯減少。
圖3.斑馬魚紅細(xì)胞抑制表型圖
（藍(lán)色虛線框內(nèi)為分析區(qū)域,分析紅細(xì)胞染色強(qiáng)度）
可以看到，供試品組心臟紅細(xì)胞染色強(qiáng)度較正常對(duì)照組明顯降低。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，供試品組的中性粒細(xì)胞數(shù)量、巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯減少，紅細(xì)胞染色強(qiáng)度明顯降低。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了此供試品誘發(fā)血液毒性。
采購中心
