美Agena 核酸質(zhì)譜分析系統(tǒng) MassARRAY
---核酸質(zhì)譜高精度DNA定性定量分析平臺
技術(shù)特點:
本系統(tǒng)的突出特點是以*的精確度和極快的速度,一次性掃描384個樣本中的多達40個SNP位點。首*行多重PCR擴增,然后有經(jīng)過修飾的ddNTP作單堿基引物延伸,使質(zhì)譜能夠準確識別堿基,并依據(jù)峰面積報告每個堿基的頻率。因此能夠準確分析樣本中的等位基因分布頻率,適用于遺傳性疾病檢測和體細胞突變檢測以及鑒別一個體的正?;蚰[瘤組織。MassARRAY 反應(yīng)體系不需要雜交,可避免雜交錯配干擾,也不需要熒光標記。其采用的高密度SpectroCHIP 芯片能在8小時內(nèi)完成3840個樣本的多重SNP鑒定,全自動分析結(jié)果,不受人為因素干擾。訪系統(tǒng)分為96孔和384孔2種不同通量和3種儀器型號供用戶靈活選擇,可滿足用戶低,中,高不同通量的使用需求。該系統(tǒng)的上市及時提供了從低到高不同規(guī)模的高效率和高質(zhì)量檢測SNP的技術(shù)平臺,順應(yīng)了當前醫(yī)學疾病基因組疾病機制研究和臨床診斷檢測迅猛發(fā)展的趨勢。
技術(shù)原理
核酸質(zhì)譜主要通過單堿基延伸和分子切割的兩種生物化學技術(shù)實現(xiàn)。
iPLEX SNP 基因型分析
Assay Designer 軟件對SNP的80-150bp區(qū)域設(shè)計多重PCR引物,并對SNP位點設(shè)計單堿基延伸引物。PCR擴增處理:5ul體系做1-40重反應(yīng),45個循環(huán);產(chǎn)物經(jīng)蝦堿性磷酸酶(SAP)處理。單堿基延伸擴增不同長度的1-40條引物,用ddNTP作用堿基延伸,200個循環(huán)。DNA質(zhì)譜檢測和數(shù)據(jù)分析精確區(qū)分4種堿基的分子量,并自動報告其生物結(jié)果。
EpiTYPER DNA 甲基化分析
亞硫酸鹽將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ琍CR擴增和SAP處理用反鏈5端帶T7啟動的引物擴增500bp, 產(chǎn)物經(jīng)蝦堿性磷酸酶(SAP)處理,體外轉(zhuǎn)錄將DNA轉(zhuǎn)錄為PRA, 堿基特異性酶切酶切T后, DNA 片段的分子量取決于亞硫酸鹽處理后的堿基變化。