UHPLC-MS痕量分析專用流動相溶劑
簡介
超高效液相色譜(UHPLC)可結(jié)合亞微米粒徑的色譜柱并在高壓下工作，提升了分析復(fù)雜樣品混合物的分辨率和靈敏度，提高了分 析速度。質(zhì)譜(MS)可對萬億分之一級的分析物進(jìn)行檢測和鑒定。超高壓液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(UHPLC-MS)是分析化學(xué)中的一個強大 工具，它需要使用特純?nèi)軇┡渲屏鲃酉嗳芤阂赃M(jìn)行痕量分析。針對UHPLC-MS的流動相我們開發(fā)了一種新級別的溶劑，它在正負(fù) 離子電離模式下基線噪音都非常低，而且金屬離子含量最少，使用光電二極管陣列檢測器全波段掃描，顯示非常低的UHPLC-UV 干擾。
| 貨號 | ||
| A956-1（乙腈，1L） | A458-1（甲醇，1L） | W8-1（水，1L） |
ATTRNAME | ATTRVALUE | ||
含量 | ≥99.9% | ≥99.9% |
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顏色 | 小于或等于5 APHA | 小于或等于5 APHA |
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鋁(Al) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鈣(Ca) | 10 ppb max. | 20 ppb max. | 5 ppb max. |
鉻(Cr) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
銅(Cu) | 5 ppb max. | 5 ppb max. | 5 ppb max. |
鐵(Fe) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鉛(Pb) | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
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鎂(Mg) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
錳(Mn) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鎳(Ni) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鉀(K) | 5 ppb max. | 5 ppb max. | 5 ppb max. |
銀(Ag) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
鈉(Na) | 20 ppb max | 20 ppb max | 20 ppb max |
鋅(Zn) | 2 ppb max. | 2 ppb max. | 2 ppb max. |
水(H2O) | 0.01% max. | 0.02% max. |
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吸光度在190 nm | ≤1.00 AU |
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吸光度在195 nm | ≤0.15 AU |
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吸光度在200 nm | ≤0.05 AU |
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吸光度在205 nm | ≤0.04 AU |
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吸光度在210 nm | ≤0.03 AU | ≤0.5 AU | ≤0.01 AU |
吸光度在215 nm | ≤0.025 AU | ≤0.4 AU |
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吸光度在220 nm | ≤0.015 AU | ≤0.2 AU | ≤0.01 AU |
吸光度在225 nm | ≤0.015 AU |
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吸光度在230 nm | ≤0.01 AU | ≤0.1 AU | ≤0.01 AU |
吸光度在240 nm |
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| ≤0.01 AU |
吸光度在254 nm | ≤0.005 AU | ≤0.01 AU | ≤0.005 AU |
吸光度在260 nm |
| ≤0.005 AU | ≤0.005 AU |
吸光度在280 nm | ≤0.005 AU | ≤0.005 AU | ≤0.005 AU |
蒸發(fā)后殘留物 | 0.8 ppm Max. | 1 ppm Max. | ≤1ppm |
可滴定酸 | 0.008 meq/g Max | 0.0003 meq/g Max |
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可滴定堿 | 0.0006 meq/g Max | 0.0002 meq/g Max |
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UHPLC-UV梯度適用性 | ≤2 mAU - PDA (200-400 nm) | ≤2 mAU - PDA (200-400 nm) | ≤2 mAU - PDA (200-400 nm) |
UHPLC-MS梯度適用性 |
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正離子模式-無添加劑 | ≤25 ppb（如撲滅津in EIC） | ≤25 ppb（如撲滅津in EIC） | ≤25 ppb（如撲滅津in EIC） |
負(fù)離子模式-無添加劑 | ≤25 ppb（如in EIC） | ≤50 ppb（如in EIC） | ≤25 ppb（如in EIC） |
產(chǎn)物離子峰信噪比(MS/MS) | > 10 S/N | > 10 S/N | > 10 S/N |
蛋白酶 |
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| 未檢出 |
所有鹵素（如氯） |
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| 未檢出 |
材料和方法
•流動相：對乙腈(ACN)、甲醇和水進(jìn)行了評測；三種溶劑均來自一個新的級別：Optima® UHPLC-MS，在正離子和負(fù)離子電離模式中下基線噪音都非常低。
•儀器：Thermo Scientific Accela UHPLC系統(tǒng)由自動進(jìn)樣器和二極管陣列檢測器組成，連接到一個配備有電噴霧離子化接口的LTQ-XL質(zhì)譜儀。
•色譜柱：Thermo Scientific Hypersil Gold™色譜柱（50毫米×2.1毫米，1.9微米），目錄號：26-102-052130。
•標(biāo)準(zhǔn)品：撲滅津（SPEX CertiPrep，S-3170，1000微克/毫升）作為正離子模式標(biāo)準(zhǔn)品，（SPEX CertiPrep，S-4032， 1000微克/毫升）作為負(fù)離子模式標(biāo)準(zhǔn)品。將這兩種標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行充分的電離，無需在流動相中施加任何添加劑。
•質(zhì)譜儀采用從100到1500 amu的全掃描電噴霧質(zhì)譜法。碰撞誘導(dǎo)解離(CID)質(zhì)譜是利用氦氣作為碰撞氣，在特定離子分離后獲得的。氣體流量和毛細(xì)管電壓等其它參數(shù)根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。
•HPLC梯度：0-0.5分鐘：90%水，10%乙腈；0.5分鐘-2.0分鐘：0%水，99%乙腈；2分鐘-5分鐘：99%乙腈；后運行5.1分鐘-10分鐘：90%水，10%乙腈。
•流速：水/乙腈體系為0.6 mL/min，水/甲醇體系為0.5 mL/min。
•進(jìn)樣量：5 µL。
結(jié)果
•通過結(jié)合UHPLC-MS靈敏度和正負(fù)離子模式下標(biāo)準(zhǔn)品的痕量分析來評測流動相溶劑的純度（圖1-10）。 為評估全掃描ESI-MS和CID生成的產(chǎn)物離子中的干擾基線峰，使用撲滅津作為正離子模式標(biāo)準(zhǔn)品（圖3-6），使用作為負(fù)離子模式標(biāo)準(zhǔn)品（圖7-10）。
討論
• 圖1圖2表示水/乙腈和水/甲醇在PDA，UV及質(zhì)譜中的空白對照。兩個溶劑系統(tǒng)中都沒有觀測到多余的峰。
• 采集全面數(shù)據(jù)(100-1500 amu)后，在正離子電離模式下，從水/乙腈和水/甲醇系統(tǒng)的提取離子色譜圖(EIC)中檢測到痕量級撲滅津 (10 ppb = 10 pg/µL)。在水/乙腈系統(tǒng)中，峰的信噪比顯示低于定量限(LOQ)。但是，25 pg/µL (25 ppb)的撲滅津在兩種溶劑系統(tǒng) 中都顯示S/N>10（圖3）。
• 撲滅津峰(m/z 230)的MS/MS使用了250 fg/µL (250 ppt)的分析物來完成，同時對m/z 188產(chǎn)物離子的信噪比進(jìn)行了監(jiān)測。在這兩 種溶劑系統(tǒng)中，撲滅津產(chǎn)物離子均顯示S/N>30（圖5和圖6），這與LTQ-XL離子阱質(zhì)譜儀的檢測靈敏度一致。
• 在負(fù)離子電離模式下，50pg/μL (50ppb)的在乙腈和甲醇系統(tǒng)中其S/N＞10（圖7）。由于TFA (m/z 113)加合物是從系統(tǒng)中 形成，兩種溶劑系統(tǒng)都檢測到m/z435的產(chǎn)物離子（圖8）。
• 5 pg/µL的(5 ppb)的MS/MS生成的m/z 257產(chǎn)物離子其S/N>10（圖9，圖10）。
結(jié)論
• 使用新的Optima® UHPLC-MS流動相溶劑，在全掃描電噴霧質(zhì)譜和CID生成的產(chǎn)物離子中，痕量級的撲滅津和標(biāo)準(zhǔn)品其峰 高均顯著高于背景峰。
• 監(jiān)控CID產(chǎn)生的產(chǎn)物離子峰是評估MS靈敏度的常用做法，同時我們還開發(fā)了一個類似的方法來評估流動相溶劑的純度。
• 使用水/乙腈流動相，250 ppt的撲滅津(m/z 230)生成的m/z 188的產(chǎn)物離子峰其S/N＞30。
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