GIBCO干粉培養(yǎng)基

作為zui早將動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基商品化的企業(yè)，GIBCO至今仍保持了在此領(lǐng)域的*地位。我們可以提供的品種以滿足用戶不同的需求（培養(yǎng)基產(chǎn)品的詳細(xì)信息請(qǐng)參考我司目錄），每一種產(chǎn)品都通過zui為嚴(yán)格的品質(zhì)管理。同時(shí)，我們也可按客戶的要求對(duì)培養(yǎng)基的配方進(jìn)行改動(dòng)，或*按客戶的配方進(jìn)行生產(chǎn)。

在培養(yǎng)基的劑型方面，我們可以提供傳統(tǒng)的干粉劑型，這種劑型有利于*儲(chǔ)存并節(jié)省儲(chǔ)存空間；同時(shí)，也可提供工作濃度的液體劑型，您可因此節(jié)省大量的時(shí)間和人力，并可減低因人為因素造成的每一批次培養(yǎng)基之間的差異；此外，我們*的10倍和50倍濃縮液體培養(yǎng)基，則結(jié)合了以上兩種劑型的優(yōu)點(diǎn)。

在包裝方面，干粉狀培養(yǎng)基通常都有10×1L，10L，50L包裝，液體培養(yǎng)基通常都有100ml, 500ml, 1000ml包裝，以適應(yīng)不同使用規(guī)模的用戶。液體培養(yǎng)基使用我司的E-Z HOLD塑料瓶裝，方便安全。

更重要的是，GIBCO對(duì)培養(yǎng)基的品質(zhì)精益求精地進(jìn)行不斷地改進(jìn)。GIBCO的干粉培養(yǎng)基因其超細(xì)的研磨粒度而保證了在同類產(chǎn)品中的溶解性，睥睨群雄。

高級(jí)顆粒技術(shù)（AGT）

AGT是使用新型顆粒形式的干粉細(xì)胞培養(yǎng)基，zui適于研究和大規(guī)模生產(chǎn)的應(yīng)用。通過將成熟的藥物生產(chǎn)fluid bed granulation 技術(shù)應(yīng)用到細(xì)胞培養(yǎng)基，我們現(xiàn)在能夠提供具有容易使用方式的現(xiàn)代化的高復(fù)合配方。

AGT是*的和pH值調(diào)節(jié)好的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基zui主要的優(yōu)點(diǎn)是給使用者提供了一種原材料，能夠降低原材料計(jì)劃、加工和檢驗(yàn)相關(guān)的費(fèi)用和時(shí)間。由于AGT培養(yǎng)基是*培養(yǎng)基，并且不需要調(diào)節(jié)pH值，培養(yǎng)基的準(zhǔn)備時(shí)間也被縮短。此外，由于顆粒迅速水化，易于溶解，因而總的培養(yǎng)基配制時(shí)間減少。

培養(yǎng)基的生產(chǎn)和制備

液體培養(yǎng)基

水的制備

用于制備液體培養(yǎng)基的蒸餾水符合美國藥典對(duì)注射用水的所有要求，包括蒸餾前的預(yù)處理。蒸餾得到的純水經(jīng)過*封閉的管道輸送到使用地點(diǎn)，通過熱交換器冷卻到配制溫度。所有的蒸餾、儲(chǔ)存和輸送過程中的管道均使用消毒的316低碳不銹鋼構(gòu)建。整個(gè)系統(tǒng)是由使用傳感和報(bào)警裝置的微處理器自動(dòng)控制。連續(xù)的在線檢測(cè)確保各種指標(biāo)符合美國藥典的要求。

化學(xué)品的加工

所有在液體培養(yǎng)基中使用的化學(xué)品原材料均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制檢測(cè)以保證我們的終產(chǎn)品的品質(zhì)符合標(biāo)準(zhǔn)。這些化學(xué)品均符合ACS、FCC標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)沒有現(xiàn)存的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)則采用我們的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。已經(jīng)確證高品質(zhì)的化學(xué)品經(jīng)過精確稱量、核對(duì)，在經(jīng)過校準(zhǔn)的配制罐中溶解在蒸餾水中。

膜過濾

GIBCO細(xì)胞培養(yǎng)基是在符合工業(yè)無菌標(biāo)準(zhǔn)1000級(jí)的設(shè)施內(nèi)進(jìn)行無菌過濾的。zui高的無菌標(biāo)準(zhǔn)為1000000級(jí)，在沒有終端滅菌的條件下是難以實(shí)現(xiàn)的?？刂茻o菌狀態(tài)的關(guān)鍵在于對(duì)所有與產(chǎn)品接觸的材料的有效的滅菌程序、綜合性環(huán)境監(jiān)測(cè)程序、對(duì)zui終過濾的整體檢測(cè)程序等。此外，在正壓條件下進(jìn)行過濾和分裝、HEPA過濾、環(huán)境控制等也是重要因素。罐裝后的培養(yǎng)基經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)，直到質(zhì)控報(bào)告完成，培養(yǎng)基的品質(zhì)被證實(shí)符合我們的標(biāo)準(zhǔn)后方可出廠。

干粉狀培養(yǎng)基

所有在干粉培養(yǎng)基中使用的化學(xué)品原材料均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制檢測(cè)以保證我們的終產(chǎn)品的品質(zhì)符合標(biāo)準(zhǔn)。這些化學(xué)品均符合ACS、FCC標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)沒有現(xiàn)存的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)則采用我們的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。

質(zhì)量控制

液體培養(yǎng)基

為了確保我們的確認(rèn)系統(tǒng)和控制持續(xù)有效，檢測(cè)采自每一批號(hào)的樣品來確定液體培養(yǎng)基的質(zhì)量。

化學(xué)檢測(cè)　

檢測(cè)滲透壓和pH值以驗(yàn)證符合產(chǎn)品規(guī)格。

微生物學(xué)檢測(cè)

通過參考使用當(dāng)前版《美國藥典》無菌檢測(cè)專論上的方法，確定液體培養(yǎng)基中沒有細(xì)菌和真菌的污染。同時(shí)，使用Barile和Kern大體積接種的檢測(cè)方法，確認(rèn)動(dòng)物來源的產(chǎn)品中沒有支原體。這些檢測(cè)的細(xì)節(jié)參看動(dòng)物血清章節(jié)“微生物檢測(cè)”。

生長(zhǎng)性能和毒性檢測(cè)

對(duì)液體培養(yǎng)基無細(xì)胞毒性和懸浮培養(yǎng)分析的生長(zhǎng)促進(jìn)作用進(jìn)行檢測(cè)。以5x10細(xì)胞/ml密度接種迅速生長(zhǎng)的鼠科骨髓瘤細(xì)胞系Sp2/O-Ag14到培養(yǎng)基中，通過監(jiān)控對(duì)數(shù)生長(zhǎng)率與生長(zhǎng)在標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照培養(yǎng)基中的培養(yǎng)進(jìn)行比較。使用合適的細(xì)胞系對(duì)特殊培養(yǎng)用培養(yǎng)基進(jìn)行性能檢測(cè)，與*的參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。

內(nèi)毒素檢測(cè)

使用Limulus Amebocyte Lysate（LAL）試驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)毒素值。通?？梢垣@得行業(yè)上可達(dá)到的zui低水平內(nèi)毒素的培養(yǎng)基。

穩(wěn)定性檢測(cè)程序

在每一個(gè)標(biāo)記為體外診斷的產(chǎn)品，所顯示的效期表明了這個(gè)產(chǎn)品具有多長(zhǎng)時(shí)間的效能。我們的穩(wěn)定性程序確定和證明了產(chǎn)品效期。周期間隙監(jiān)測(cè)批量產(chǎn)品，確定產(chǎn)品在*貯存條件下具有可接受效果的時(shí)間長(zhǎng)度。

干粉培養(yǎng)基

按照規(guī)范的要求，評(píng)估來自每一批次的樣品，已確定干粉培養(yǎng)基的質(zhì)量。準(zhǔn)備1x液體形式的樣品，膜過濾，監(jiān)測(cè)可能包括：

通過所述液體培養(yǎng)基檢驗(yàn)條件，確定這些參數(shù)的數(shù)值。所有的干粉培養(yǎng)基中不包含碳酸氫鈉，以增加其穩(wěn)定性。

貯存條件　

為了達(dá)到*的性能，根據(jù)標(biāo)簽上*的條件貯存細(xì)胞培養(yǎng)用產(chǎn)品，無論是在貯存或使用條件下，應(yīng)該盡量減少液體培養(yǎng)基暴露在各種光源下。

質(zhì)檢報(bào)告

如果客戶有要求，可以獲得所有細(xì)胞培養(yǎng)用產(chǎn)品的質(zhì)檢報(bào)告。這一證書提供了除標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)簽數(shù)據(jù)和公開說明書以外的，對(duì)全部GIBCO™細(xì)胞培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基和試劑所進(jìn)行檢驗(yàn)的結(jié)果。也提供預(yù)期產(chǎn)品在使用上與公開的FDA指導(dǎo)方針*性相關(guān)的重要信息。

常用培養(yǎng)液配制方法

液體培養(yǎng)基：從10x濃縮液配制1x培養(yǎng)液

為了配制合乎標(biāo)準(zhǔn)、zui終單一濃度的培養(yǎng)液，在無菌條件下進(jìn)行下列步驟。我們*在這個(gè)操作過程中使用雙蒸水（cat.5230）和7.5%碳酸氫鈉（cat.No.25080）。使用經(jīng)過合適濾器進(jìn)行濾膜過濾的無菌的1N氫氧化鈉溶液或1N鹽酸溶液。同時(shí)要注意，為了溶解，我們調(diào)節(jié)了10x培養(yǎng)基和10x平衡鹽溶液的pH值，因而你需要在稀釋后調(diào)節(jié)pH值，加入適量的碳酸氫鈉。

配制干粉培養(yǎng)基

細(xì)胞分離

從原代組織中分離細(xì)胞

從原代組織中獲得單細(xì)胞懸液的一般方法是酶解聚。細(xì)胞暴露在酶中的時(shí)間要盡可能的短，以保持zui大的活性。下列步驟可以解聚整個(gè)組織，獲得較高產(chǎn)量的有活性細(xì)胞。

從原培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞

以下是從基層迅速分離細(xì)胞，而且保持細(xì)胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對(duì)于所有細(xì)胞系的廣泛的應(yīng)用，每一種系統(tǒng)*條件和施用濃度應(yīng)該根據(jù)經(jīng)驗(yàn)加以確定。

        ● 再次培養(yǎng)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞的活性。

        ● 細(xì)胞的活率應(yīng)該超過90％

        ● 對(duì)于無血清培養(yǎng)基，建議降低胰蛋白酶使用量。

哺乳細(xì)胞的凍存

為了避免污染造成的損失，zui小化連續(xù)細(xì)胞系的遺傳改變和避免有限細(xì)胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細(xì)胞。凍存細(xì)胞前，細(xì)胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。

凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

凍存細(xì)胞比較脆弱，要求輕柔的操作。凍存細(xì)胞要快速融化，并且直接加入*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。如果細(xì)胞對(duì)凍存劑（DMSO或甘油）特別敏感，離心去除凍存培養(yǎng)基，然后加入*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。