徠卡TCS SP8納米顯微鏡 Leica TCS SP8 STED——納米級世界的真正本質(zhì)
納米顯微技術(shù)為亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和動態(tài)研究帶來了相當(dāng)?shù)淖兓蔀闊晒獬上裥碌臉?biāo)準(zhǔn) (該技術(shù)榮獲 2014 年諾貝爾化學(xué)獎)。
高度整合的 STED (STimulated Emission Depletion，受激發(fā)射損耗) 系統(tǒng) Leica TCS SP8 STED 3X 和 Leica TCS SP8 STED ONE 滿足日常研究的需求，并且以純光學(xué)方式快速、直觀地呈現(xiàn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)突破衍射極限的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。
X、Y 和Z 軸上的分辨率都變得可調(diào)。
成人腎臟樣品體表下 45-65 µm 深處的納米顯微成像。20 µm xyz共聚焦/3D STED。STAR 635P 標(biāo)記腎病蛋白。樣品經(jīng)修改的 CLARITY 程序進(jìn)行透明化處理。STED 物鏡：HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR – STED WHITE。樣品特別感謝：瑞典斯德哥爾摩工學(xué)院 (KTH)，David Unnersj?-Jess。
您想要從 STED 成像開始您的工作？
無需投資購買專用儀器，即刻親見生命的奧秘。新型 Leica TCS SP8 STED ONE 592 和 STED ONE 660 納米顯微鏡以多功能創(chuàng)新共聚焦平臺 Leica TCS SP8 為基礎(chǔ)，是納米顯微技術(shù)的戰(zhàn)略性入門設(shè)備。Leica HyD 混合檢測器將光譜檢測和靈敏度相結(jié)合，并輔以白光激光的自由激發(fā)，使 Leica Microsystems 的 STED 納米顯微鏡成為一種靈活的工具，適用領(lǐng)域絕不僅止于納米顯微技術(shù)。
如果您需要盡可能多地進(jìn)行多熒光團(tuán)多顏色成像，Leica TCS SP8 STED 3X 允許您使用多達(dá)三條 STED 譜線，在整個可見光全光譜內(nèi)進(jìn)行STED成像。
增強(qiáng)科研實(shí)力的技術(shù)
● 納米顯微技術(shù)可直接運(yùn)用于 x、y 和 z 軸，并且可調(diào)，為您揭示細(xì)微的結(jié)構(gòu)
● STED WHITE 物鏡提供全光譜范圍的色差校正
● motCORR STED 物鏡實(shí)現(xiàn)深度實(shí)時圖像
● 多條 STED 譜線支持全可見光全光譜超高分辨率成像
● 門控檢測提高分辨率，改善活細(xì)胞成像性能
● 自動光束校準(zhǔn)，確保穩(wěn)定性和可靠性
● Huygens 反卷積技術(shù)，從原始數(shù)據(jù)中獲取更多信息
● 基于 TCS SP8 的模塊化概念，隨時升級
多色納米顯微技術(shù)
涵蓋可見光全光譜
多色標(biāo)記的應(yīng)用使我們對各種結(jié)構(gòu)的相互關(guān)系有了更深入的了解。共定位研究通常使用 STED ONE 納米顯微鏡來完成。STED 3X 的多條 592 nm 和 660 nm STED 激光譜線以及 775 nm 脈沖激光 (分辨率可達(dá) 30 nm) 涵蓋可見光全光譜，可以獲取許多適用的熒光團(tuán)。
更多顏色，成就與眾不同！
白光激光、AOBS (聲光分光器) 和可調(diào)光譜檢測器結(jié)合在一起，使您可對任何熒光團(tuán)組合成像，極度靈活地執(zhí)行多色實(shí)驗(yàn)。
HeLa 細(xì)胞三重免疫染色 STED 圖像：綠色：NUP153-Alexa 532，紅色：網(wǎng)格蛋白-TMR，白色：肌動蛋白-Alexa 488。
光學(xué)器件成就的納米顯微技術(shù)
STED WHITE – 絲毫無損光學(xué)器件品質(zhì)
如果需要解析微小的細(xì)節(jié)，優(yōu)質(zhì)的光學(xué)器件是首要的關(guān)鍵前提。三個 STED WHITE 物鏡色彩校正性能良好，可確保在整個可見光譜范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)理想激發(fā)覆蓋和 z 軸 STED PSF?？稍?92/660/775STED使用白激光作為 激發(fā)光。隨心所欲地為 STED 納米顯微技術(shù)自由選擇比以往更多的熒光團(tuán)。
STED WHITE物鏡深活納米細(xì)胞
使用 STED WHITE 油浸物鏡 (HC PL APO 100x/1.40 OIL)，可輕松進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)固定樣品成像。它可實(shí)現(xiàn)非常高的數(shù)值孔徑和分辨率。對于較為復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)，使用新型 STED WHITE Glycerin 物鏡 (HC PL APO 93X/1.30 GLYC motCORR) 可為您創(chuàng)造新的機(jī)遇。電動修正環(huán)可根據(jù)不同的蓋玻片厚度、溫度和樣品不均勻性，精確、快速調(diào)節(jié)光學(xué)物鏡。3D STED 在室溫和 37°C 下都能清晰呈現(xiàn)樣品體表下的細(xì)節(jié)
新！用于水介質(zhì)的STED White 物鏡！
HCS PL APO 86x/1.2 W motCORR物鏡在水環(huán)境實(shí)驗(yàn)中具有優(yōu)良性能。電動校正環(huán)結(jié)合折射率匹配使得該物鏡是水介質(zhì)成像的理想伙伴。
STED WHITE 物鏡的色差校準(zhǔn)?；疑摼€和實(shí)線分別描繪不同景深。
門控 STED – 通往活細(xì)胞納米顯微成像的坦途
活細(xì)胞成像：麻醉果蠅幼蟲體表下大約 10 µm 處沿軸突移動的致密核心囊泡 (標(biāo)有 ANF GFP)。每隔 0.45 秒記錄一張共聚焦和 STED 圖像。上方影像：通過 TrackMate (FiJi) 執(zhí)行的粒子追蹤。
gSTED – 圖像更多，精細(xì)結(jié)構(gòu)更入微
門控 STED 為備受認(rèn)可的 STED CW 功能帶來實(shí)質(zhì)性的擴(kuò)展，能夠獲得更高的分辨率或選擇更低的激光功率。
懸浮液中活 T細(xì)胞。共聚焦和 STED 3D 重構(gòu)。投影。特別感謝：英國牛津大學(xué)韋瑟羅爾分子醫(yī)學(xué)研究所，MRC 人類免疫學(xué)研究單位，Marco Fritsche、Mathias Clausen 和 Christian Eggeling。
使用 HyD 和白光激光實(shí)現(xiàn)低于 50 nm 的分辨率
Leica HyD 混合檢測器與作為脈沖激發(fā)源的白光激光搭配使用，可以僅檢測來自激發(fā)脈沖之后某一時間窗口的熒光信號。平移時間窗，使其遠(yuǎn)離激發(fā)脈沖，可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)低于 50 nm 的分辨率。在相同的激光功率下，門控 STED 的分辨率比 STED CW 高 50% 以上。無需更多的 STED 光便能觀察更細(xì)微的細(xì)節(jié)，提升活細(xì)胞的成像能力。
在 STED CW 顯微鏡有效焦點(diǎn)上，熒光團(tuán)生命周期的分配。長壽命狀態(tài) (紅色) 處于中心區(qū)域，短壽命狀態(tài) (藍(lán)色) 處于外圍區(qū)域。
第三維度的 STED
多條 STED 光路
使用 TCS SP8 STED 3X 和 TCS SP8 STED ONE，儀器可提供兩條光路，產(chǎn)生不同的 STED 模式。STED 光可在兩條光路之間無級分配。
設(shè)計(jì)您的 PSF
您可選擇理想橫向分辨率、縱向分辨率或兩者之間的任意設(shè)置，以獲取理想的結(jié)果。超薄的光學(xué)切面為您揭示不為人知的細(xì)節(jié)。STED 3X 和 STED ONE 使您的顯微鏡分辨率在所有維度都能契合您的科學(xué)問題和樣品需要。
Huygens 反卷積后的Z 軸堆棧(91 個平面)的表面渲染 3D 重構(gòu)。與共聚焦結(jié)果 (紅色) 相比， STED 使 xy (后面的綠色扇區(qū)) 或所有維度 (前面的綠色扇區(qū)) 的分辨率時，STED 數(shù)據(jù) (綠色) 呈現(xiàn)，橫向分辨率明顯提升。很顯然，3D STED 呈現(xiàn)的觀測結(jié)構(gòu)效果更理想。
選擇您的分辨率
通過在兩條 STED 光路中分配光線提升分辨率：傳統(tǒng)渦流圓環(huán)可實(shí)現(xiàn)理想橫向分辨率，新型 z 軸圓環(huán)可實(shí)現(xiàn)理想縱向分辨率。還可針對最小聚焦容積進(jìn)行優(yōu)化。
STED 軟件解決方案 – 對分辨率了如指掌
STED 顯微技術(shù)是快速直接的超高分辨顯微技術(shù)。使用 LAS X，您可暢享其便捷性。通過預(yù)估的有效 PSF 示意圖，可以直接在線查看對所選技術(shù)參數(shù)效果的反饋。
直觀的工作流程
通過智能 STED 向?qū)В恍杌瑒尤齻€簡單的滑塊，便可控制儀器。借助有效 PSF 示意圖，在衍射極限的情況下，您可定義您所需的超高分辨率等級。為了得到理想結(jié)果，向?qū)⒄{(diào)節(jié)所有必要的設(shè)置，如 STED 激光強(qiáng)度、像素尺寸、Z 步進(jìn)、針孔、門控設(shè)置和圖像平均次數(shù)。
智能 STED 工作流程：1. 使用 STED 和 3D 滑塊調(diào)節(jié)所需的有效 PSF。2. 使用劑量滑塊在信噪比和圖像數(shù)量之間選擇。
3. 確定共聚焦實(shí)時掃描時的感興趣區(qū)域，并相應(yīng)調(diào)節(jié)激發(fā)光。4. 采集單幅或自動序列圖像，獲得超高分辨率數(shù)據(jù)。
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