特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)商 |
英文名稱 | Carnobacterium maltaromaticumPCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
人增殖相關(guān)蛋白2G4(PA2G4)ELISA試劑盒25G 0.156-10 ng/mLN-(2-溴乙基)鄰苯二酰亞胺 N-(2-Bromoethyl)phthalimide >98.0%(GC&T)
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基/三糖鐵培養(yǎng)基/TSI瓊脂/TripleSugarIronAgar9011-17-0腸桿菌科細(xì)菌的生化試驗9011-17-0
木糖-明膠培養(yǎng)基發(fā)酵管1067620-90BRN-DidemethylsibutramineCitrateStandard
小鼠胚胎干細(xì)胞,E14細(xì)胞 20mg HPLC≥98%Nobiletin用于含量測定1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶川陳皮素;川皮亭;蜜橘黃素
IL-1beta/IL1B/IL1F2抗體,兔多抗7 x 10mgELISA 甜菊糖標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 STEVIA, COMMON GLYCOSIDES STANDARDS KIT(P)
人線粒體胍丁胺酶(Agmatinase,mitochondrial)ELISA試劑盒6199-67-3 20mgCucurbitacin B HPLC≥98% 0.312-20 ng/mL葫蘆素B;葫蘆苦素 B
IL18R1抗體(FITC),鼠單抗35825-57-1HPLC≥98%A006120mg/支FCM 隱丹參
ELISAKitforHumanPikachurin127-91-3 20mg beta-Pinene 312-20000 pg/mLB-蒎(95%)
JNK2/MAPK9抗體,兔單抗94942-49-1C16H14O66-methoxynaringenin HPLC≥98%ELISA WB IHC-P IF IP ICC/IF 6-氧基柚皮素
M-肉湯250mg 250gGibberellic Acid(GA3) 赤霉素
牛津瓊脂(OXA)平板(9cm)96孔 10個/包β-興ELISA快速檢測試劑盒
ELISAKitforHumanMediatorofRNApolymeraseIItranscriptionsubunit31500G 1.56-100 ng/mL2-溴乙基乙基 2-Bromoethyl Ethyl Ether >95.0%(GC)
ELISAKitforHumanFibroblastgrowthfactor2010284-63-6 20mg D-Pinitol 0.156-10 ng/mLD-松
人胃蛋白酶(PP)ELISA試劑盒1g 3.12-200 ng/mLα-氯糖 CHLORALOSE, a-(RG)
MCPC培養(yǎng)基/MCPCMediumBIOPHENCS-01(38) S-2238 S-2222弧菌的分離培養(yǎng)法國BioMed發(fā)色底物 S-2238北京代理
ELISAKitforHumanUDP-glucuronosyltransferase1-650mg 0.156-10 ng/mL蘿芙堿 AJMALICINE(P)
麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒供應(yīng)商快速檢測盒,食品安全檢測試劑 100次/盒 YT肉湯/YTBroth
對羥基苯 20mg 4-FORMYLPHENOL 人胰島素受體(ISR)ELISA試劑盒
黃豆苷 DAIDZIN(P) (Compendial Traceable) 25mg ELISAKitforHumanHeparincofactor2
棘苷;斯皮諾素 HPLC≥98% A0585 Tie2/CD202b/TEK抗體,兔單抗 20mg/支
補(bǔ)骨脂素;補(bǔ)骨脂黃 HPLC≥98% Bavachin 人子細(xì)胞,HeLa細(xì)胞 用于含量測定
乙氧基白屈菜紅堿 20mg Ethoxychelerythrine ELISAKitforHumanCarboxypeptidaseB2
7-表-10-脫乙酰基紫杉 DEACETYLTAXOL, 7-EPI-10-(P) 10mg 人神經(jīng)肽FF感受器2(NPFF2)ELISA試劑盒
酵母雙雜交系統(tǒng) ACE1 李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎(chǔ)顆粒