在生物制藥純化過程中,通常有3~5步層析步驟。一般來說,這些步驟使用了不同的分離模式,如親和、離子交換、凝膠過濾和疏水相互作用等。過去的十年中,由于微生物和哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展,促進(jìn)表達(dá)量顯著提高,間接增加下游純化的挑戰(zhàn)。兼具兩種或多種層析原理的多模式層析填料,成為純化的新選擇。
下面為大家介紹百林科幾款多模式填料產(chǎn)品性能和應(yīng)用案例。
陰離子+疏水多模式系列產(chǎn)品
MaXtar MMA (平均粒徑75μm)和MaXtar MMA HR(平均粒徑40μm),兩款填料由多個(gè)不同性質(zhì)的基團(tuán)組成:氨基、氫鍵和疏水基團(tuán)。該層析介質(zhì)可以去除聚集體、核酸、宿主蛋白、病毒等主要雜質(zhì),廣泛應(yīng)用于多糖、抗體、病毒載體或疫苗領(lǐng)域。具有明顯的性能優(yōu)勢:
• 改良的 MaXtar 基架具有更強(qiáng)剛性,因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速,提高工藝效率。
• 高動態(tài)載量,一步結(jié)合大部分雜質(zhì),節(jié)約時(shí)間和成本。
• 耐受廣泛的 pH 和電導(dǎo)率范圍,有助于摸索最優(yōu)工藝條件。
• 多用于挑戰(zhàn)性樣品的純化,尤其對聚集體去除表現(xiàn)突出。
陽離子+疏水多模式系列產(chǎn)品
MaXtar MMC (平均粒徑75μm)和MaXtar MMC HR(平均粒徑40μm),兩款填料由多個(gè)不同性質(zhì)的基團(tuán)組成:羧基、氫鍵和疏水基團(tuán)。該層析介質(zhì)能在高電導(dǎo)率環(huán)境下,依然保持對帶正電的生物分子的結(jié)合能力,便于前序高鹽洗脫或高鹽預(yù)處理后樣品的分離純化。具有明顯的性能優(yōu)勢:
• 改良的 MaXtar 基架具有更強(qiáng)剛性,因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速,提高工藝效率。
• 在高電導(dǎo)率環(huán)境下,依然保持高動態(tài)載量,省去緩沖液置換操作,提高收率,節(jié)約成本。
• 更小的粒徑可以為層析工藝提供更高的分辨率,使產(chǎn)物的純度更高。
???應(yīng)用案例
案例一:MaXtar MMA流穿模式去除聚集體
• 預(yù)平衡Buffer: 50 mM NaAc-HAc , pH 4.0
• 平衡Buffer: 50 mM NaAc-HAc, 125 mM NaCl, pH 5.0
• 上樣:雙抗陰離子收獲液(醋酸調(diào)節(jié)pH調(diào)節(jié)到5.1)(載量40 mg/ml)
• 淋洗Buffer: 50 mM Tris-HCl, pH5.0
圖1: MaXtar MMA層析圖譜
圖2: MaXtar MMA層析前后SEC-HPLC檢測圖譜
小結(jié):結(jié)合層析圖譜和SEC-HPLC檢測圖譜可見,純度由91.8%提升至99.5%,雙抗的聚集體含量由 6% 下降到至 0.5%,聚集體去除明顯。
案例二:MaXtar MMC流穿模式去除聚集體
• 平衡Buffer: 50 mM NaAc-HAc, 225 mM NaCl ,pH 5.5
• 上樣:雙抗親和收獲液(調(diào)節(jié)pH調(diào)節(jié)到5.5)(載量40 mg/ml)
• 淋洗Buffer: 50 mM NaAc-HAc, 225 mM NaCl, pH 5.5
圖3: MaXtar MMC層析圖譜
圖4: MaXtar MMC層析前后SEC-HPLC檢測圖譜
小結(jié):通過層析圖譜和SEC-HPLC檢測圖譜可見,純度由96.5%提升至99.7%,雙抗的聚集體含量由 3.5% 下降到至 0.3%,聚集體去除效果同樣明顯。
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