提到抗體項(xiàng)目的開發(fā)，最令研發(fā)人員“頭禿”的，莫過(guò)于目標(biāo)產(chǎn)物變體(例如聚體和片段)去除，真是一不小心就容易“踩雷”。今天就給大家推薦一款“神器”--疏水層析介質(zhì)。
通常情況下，目標(biāo)產(chǎn)物變體(例如聚體和片段)去除的難點(diǎn)，往往在于其與目標(biāo)產(chǎn)物性質(zhì)的相似性，例如等電點(diǎn)相近，表面電荷差異小等等，這也給純化蛋白帶來(lái)不小的挑戰(zhàn)。
疏水作用，主要是利用分子表面的疏水性的差別來(lái)分離蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子的一種層析方法。在疏水層析介質(zhì)的配基中，丁基Butyl -辛基Octyl -苯基Phenyl的疏水性在依次增加。通常，目標(biāo)蛋白會(huì)在高鹽體系下與疏水性填料進(jìn)行結(jié)合，在低鹽條件下進(jìn)行洗脫；依照待分離物質(zhì)疏水性強(qiáng)弱，調(diào)節(jié)上樣鹽濃度，達(dá)到依次洗脫的效果。
疏水層析示意圖
百林科可以提供包括MaXtar基架，MaXtar HR基架，Chromstar FF基架，Chromstar HP基架的不同疏水層析介質(zhì)。其中，
MaXtar基架層析介質(zhì)的平均粒徑是75μm，
MaXtar HR基架層析介質(zhì)的平均粒徑是40μm，
Chromstar FF基架層析介質(zhì)的平均粒徑是90μm，
Chromstar HP基架層析介質(zhì)的平均粒徑是34μm。
應(yīng)用案例 1
層析圖譜
? 層析柱：Chrom-Screen MaXtar Phenyl HR 4.7ml；10 cm
? 平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
? 上樣：客戶樣品(調(diào)節(jié)電導(dǎo)至130 mS/cm)，載量30 mg/ml
? 洗脫液：20 mM Tris, pH 7.4
? 保留時(shí)間：5 min
純化前后SEC-HPLC檢測(cè)圖譜
(左圖：純化前；右圖：純化后)
小結(jié)：實(shí)驗(yàn)圖譜和SEC-HPLC檢測(cè)圖譜分析得出，MaXtar Phenyl HR可將該樣品純度由95.41%提升至99.40%以上，聚體含量則由4.59%下降至0.60%，由此可見，MaXtar Phenyl HR對(duì)雙抗聚體去除效果明顯。
應(yīng)用案例 2
層析圖譜
? 填料： Butyl Chromstar HP
? 層析柱：Chrom-Screen 4.7ml；10cm
? 樣品：雙抗樣品(調(diào)節(jié)電導(dǎo)至130mS/cm)
? 平衡液：20 mM Tris, 1 M (NH4)2SO4, pH 7.4
? 洗脫液：20 mM Tris, pH 7.4
? 保留時(shí)間：5min
純化前后SEC-HPLC檢測(cè)圖譜
(左圖：純化前；右圖：純化后)
小結(jié)：由層析圖譜和SEC檢測(cè)圖譜可以看出，Butyl Chromstar HP可將樣品純度由95.41%提升至98.8%，聚體含量則由4.59%下降至1.20%，去除聚體效果明顯。
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