體外診斷試劑的關(guān)鍵原料分為兩塊，一是抗原抗體，二是特殊成分?？乖贵w作為重要原料，影響整個(gè)試劑的核心質(zhì)量。在生產(chǎn)上，所用抗體一般通過重組抗原免疫動(dòng)物來制備單克隆抗體或多克隆抗體，后進(jìn)行配對(duì)篩選應(yīng)用于免疫檢測(cè)。His(組氨酸)標(biāo)簽和GST(谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶)標(biāo)簽常用于重組抗原的表達(dá)純化的親和標(biāo)簽。
一 His標(biāo)簽
His標(biāo)簽由于其分子量小、與金屬離子結(jié)合能力強(qiáng)以及在變性條件下也可保持與介質(zhì)結(jié)合的特性，已成為常用的親和標(biāo)簽，Ni2+固定化金屬離子親和層析已成為純化組氨酸標(biāo)簽蛋白的標(biāo)準(zhǔn)方法。
對(duì)于His標(biāo)簽的重組抗原純化：
原理
1、His-Tag組氨酸的殘基上帶有1個(gè)咪唑基團(tuán)，可與多種金屬離子發(fā)生特殊的相互作用，如Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+，F(xiàn)e3+等，再用咪唑競(jìng)爭(zhēng)洗脫，達(dá)到分離純化的效果。
2、Ni2+有六個(gè)螯合價(jià)位，被含有3,4或5個(gè)電子供體基團(tuán)的螯合物固定在吸附劑上；所以IDA與His標(biāo)簽蛋白結(jié)合的能力相對(duì)更強(qiáng)，特異性較弱，而TED則相反。
百林科Ni填料產(chǎn)品：
高流速：Ni Chromstar® FF(NTA)
Ni Chromstar® FF是純化組氨酸標(biāo)簽蛋白質(zhì)的首選，具有載量高、易再生、成本低等優(yōu)點(diǎn)。
高分辨率：Ni Chromstar® HP (NTA)
相比于 Ni Chromstar® FF，Ni Chromstar HP 具有更細(xì)的顆粒粒徑，提供更高的分辨率，可有效提升純化的蛋白純度和濃度。
高純度：Ni Chromstar® Excel
Ni Chromstar® Excel是百林科最新一代His標(biāo)簽親和填料，采用TED五價(jià)偶聯(lián)方式，Ni2+結(jié)合更牢固，不易脫落，一步純化純度可達(dá)到90%，具有明顯優(yōu)勢(shì)，當(dāng)然載量也會(huì)相應(yīng)降低。
Ni Chromstar® FF純化案例分享
實(shí)驗(yàn)步驟：
Ni Chromstar® Excel與Ni Chromstar® FF純化對(duì)比：
由上圖可以看出，純化相同樣品，Ni Chromstar® Excel純度明顯高于Ni Chromstar® FF。
Ni Chromstar® Excel優(yōu)勢(shì)：
01 耐受100mM EDTA，簡(jiǎn)化樣品前處理，無需換液操作。
02 可直接CIP，無需脫Ni，直接進(jìn)行0.1M或0.5M NaOH徹底清洗，有效避免交叉污染， 延長(zhǎng)使用壽命。
03 Ni脫落率顯著降低，無需反復(fù)再生，使用保存更加方便。
二 GST標(biāo)簽
GST標(biāo)簽(分子量~26kDa)也是重組蛋白常用的標(biāo)簽，其具有良好的水溶性，常被用來表達(dá)水溶性不是特別好的蛋白，增加蛋白的可溶表達(dá)。通常使用Glutathione對(duì)GST標(biāo)簽進(jìn)行純化，可以獲得比使用His標(biāo)簽純化更好的純度，該標(biāo)簽的用途也非常廣泛。
原 理
利用層析填料上的還原型谷胱甘肽(GSH)可以與帶GST標(biāo)簽的重組蛋白特異性結(jié)合的性質(zhì)，將重組蛋白分離出來。
百林科GST親和純化層析填料產(chǎn)品：
1 高流速：Glutathione Chromstar® FF
Glutathione Chromstar® FF高流速特點(diǎn)適合后期工藝放大，由于GST標(biāo)簽純化原理是酶與底物的反應(yīng)，所以在使用過程中也要注意流速和結(jié)合效率的平衡。
2 高載量：Glutathione Chromstar® 4B
Glutathione Chromstar® 4B具有載量高的特點(diǎn)，此款填料可以有效提升弱結(jié)合蛋白與柱子的結(jié)合效率，可適用于弱結(jié)合蛋白。
3 高分辨率：Glutathione Chromstar® HP
Glutathione Chromstar® HP的平均粒徑約為34μm，分辨率高，所以洗脫的蛋白濃度和純度更高，同時(shí)需要注意細(xì)粒徑也會(huì)伴隨著背壓相對(duì)較高的特點(diǎn)。
GST標(biāo)簽親和純化案例[1-2]：
SDS-PAGE圖片來源：
[1] 麻粉蓮,張騫,鄭麗舒.人乳頭瘤病毒18型L1蛋白的包涵體和可溶性表達(dá)及純化[J].生物技術(shù)通訊,2014,25(06):800-803.
[2] 石松,薛殿婷,張培等.人MAPK3基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J].貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2021,46(10):1145-1150.DOI:10.19367/j.cnki.2096-8388.2021.10.005
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