帶狀皰疹是由水痘——帶狀皰疹病毒
(varicella-zoster virus，VZV)
引起的一種感染性疾病。
對于該感染性疾病，醫(yī)學上尚無特效藥，對其進行預防接種疫苗則成為目前有效、經濟的手段。當今帶狀皰疹疫苗的研發(fā)工藝路徑主要分為三種類型：減毒活疫苗、基因工程重組疫苗及mRNA疫苗。目前，全球銷售規(guī)模較大的疫苗則主要以重組帶狀皰疹疫苗為主。
重組帶狀皰疹疫苗層析純化工藝路線
陰離子捕獲——MaXtar® Q
在捕獲階段選擇陰離子交換層析介質，可以去除一大部分HCP和雜質蛋白，更大程度獲取目的物。百林科MaXtar® Q強陰離子交換層析介質，其基架具有更強剛性，在較低的反壓下能夠實現(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率；配基偶聯(lián)方式的升級，可以有效提高層析介質的動態(tài)結合載量。
MaXtar® Q能有效捕獲目的蛋白
MaXtar® Q純化重組帶狀皰疹疫苗發(fā)酵液上清，能有效捕獲高純度目的蛋白。
層析柱：Chrom-LinX® 26/400，柱高20 cm
樣品：重組帶狀皰疹疫苗發(fā)酵液上清
Buffer A：20mM PB，pH6.8
Buffer B：20mM PB，1M NaCl，pH6.8
流速：120 cm/h
圖1 MaXtar® Q純化帶狀皰疹疫苗層析圖譜
針對MaXtar® Q純化層析介質，百林科也對其在耐酸堿鹽條件下的使用壽命做了一定研究。通過模擬CIP條件(1M HAc+1M NaCl，1M NaOH)，進行150個循環(huán)后，我們發(fā)現(xiàn)，MaXtar® Q的動態(tài)結合載量沒有明顯差異。
圖2 不同循環(huán)測試MaXtar® Q的動態(tài)結合載量表現(xiàn)
疏水中度純化——Phenyl Chromstar® HP
中度純化階段選擇疏水相互作用層析介質，去除樣品中的主要雜質，并進一步去除HCP。百林科的Phenyl Chromstar® HP采用細粒徑設計，分辨率提高。
Phenyl Chromstar® HP分辨率高
帶狀皰疹疫苗經Phenyl Chromstar® HP疏水層析介質純化后純度可達98%。
層析柱：Chrom-LinX® 26/200，柱高15 cm
樣品：Maxtar® Q洗脫收集液(加入硫酸銨至電導為98-105 mS/cm)
Buffer A：0.6M (NH4)2SO4·PBS
Buffer B：純化水
流速：120 cm/h
圖3 Phenyl Chromstar® HP純化帶狀皰疹疫苗層析圖譜
圖4 Phenyl Chromstar® HP純化后
帶狀皰疹疫苗HPLC-SEC圖
陽離子精純——MaXtar® SP HR
精純階段選擇陽離子交換層析介質，經合適的純化條件，采用流穿模式，使內毒素、HCD、HCP等痕量雜質結合，目的蛋白流穿。百林科的MaXtar® SP HR在有效去除HCP和HCD雜質的情況下，具有優(yōu)異的放大生產性能，其基架具有更強剛性，因此在較低的反壓下能夠實現(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率；配基偶聯(lián)方式的升級，可以有效提高層析介質的動態(tài)結合載量；具有更細的顆粒粒徑，有效提高層析介質的分辨率。
MaXtar® SP HR能有效去除HCP和HCD雜質
經MaXtar® SP HR純化后，HCP和HCD均符合質量要求。
層析柱：Chrom-LinX® 26/200，柱高10 cm
樣品：超濾后收集液
Buffer A：20mM PB，pH5.8
Buffer B：20mM PB，1M NaCl，pH5.8
流速：60 cm/h
圖3 MaXtar® SP HR純化帶狀皰疹疫苗層析圖譜
表1 MaXtar® SP HR純化前后HCP和HCD結果對比
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