體外培養(yǎng)細胞的條件

(1)營養(yǎng)需求

·氨基酸----12種必須氨基酸(纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、組氨酸、酪氨酸、精氨酸、半胱氨酸)；10種非必須氨基酸；此外還需要谷氨酰胺，它在細胞代謝過程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶合成的來源，同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質。

·碳水化合物----糖類--葡萄糖；半乳糖；細胞對葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖低。

·無機鹽----鈉、鉀、鎂、磷、鈣等；

·維生素----生物素、葉酸、核黃素、維生素C、維生素B12、吡哆醇等；

·蛋白質與肽----白蛋白、抑肽酶、胎球蛋白、纖粘連蛋白、轉鐵蛋白、生長因子；

·脂肪酸和脂類物質----亞油酸、油酸、膽固醇等；

·微量元素----鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。

(2)溫度

常用的溫度是37°，但需要注意不同生物來源的組織細胞，最適宜的培養(yǎng)溫度是不同的，且細胞耐低溫，不耐高溫。在生理溫度范圍內，溫度與細胞生長率呈正相關。

(3)滲透壓

滲透壓的大小主要由培養(yǎng)基中各種鹽成分的濃度決定。細胞必須生活在與自身原生質體等滲的環(huán)境中，若生存環(huán)境滲透壓高于自身，培養(yǎng)的細胞則有可能會面對脫水而亡，若生存環(huán)境滲透壓低于自身，培養(yǎng)的細胞則有可能面對吸水漲破而亡，但大多數(shù)培養(yǎng)細胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細胞的理想滲透壓。鼠細胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對于培養(yǎng)大多數(shù)哺乳動物細胞，控制培養(yǎng)基的滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍為宜。

(4)氣相

體外細胞培養(yǎng)的氣相環(huán)境常由5% CO2與95%空氣構成。其中O2參與細胞的能量代謝過程。CO2用于維持培養(yǎng)液的酸堿度。

(5) pH

適宜大多數(shù)細胞生長的培養(yǎng)基pH在7.0-7.4之間，pH7.4的環(huán)境適合大多數(shù)的哺乳動物細胞系。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑，用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度，在低pH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的pH值時使培養(yǎng)液呈紫色，pH值7.2-7.4時為紅色，適合細胞培養(yǎng)。

(6)無毒無污染

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的前提條件。在活體的細胞的解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)，可抵抗微生物或其他有害物質的入侵，但細胞在體外培養(yǎng)中，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護從而喪失對微生物的防御能力和對有害物質的解毒能力。因此保證細胞的生長環(huán)境的無毒無污染是細胞培養(yǎng)成功的首要條件。在細胞培養(yǎng)過程一定要注意防止有毒化學物質污染、微生物污染、不同細胞間交叉污染。