大型質(zhì)粒抽提試劑盒 返回列表頁

無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒

EndoFree Plasmid Maxi Kit

（產(chǎn)品咨詢：/：）

簡介：

純化得到至多500 μg無內(nèi)毒素高轉(zhuǎn)染級純質(zhì)?；蚩滤官|(zhì)粒DNA

1.純化得到的DNA內(nèi)毒素低于0.1 EU/µg

2.純化流程快，同時去除內(nèi)毒素

3.獲得高產(chǎn)量的高拷貝質(zhì)粒DNA

4.使用LyseBlue，獲得*的裂解和高產(chǎn)量的DNA

EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術(shù)，可快速制備不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液，DNA產(chǎn)量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉(zhuǎn)染級純的應(yīng)用。

詳細(xì)信息：

性能

EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內(nèi)毒素去除步驟整合到質(zhì)粒純化過程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Maxi Cartridge過濾細(xì)菌裂解液，通過重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質(zhì)粒DNA。100–250 ml培養(yǎng)菌液至多可純化500 µg DNA。（培養(yǎng)量取決于質(zhì)?？截悢?shù)量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質(zhì)。）純化的DNA無內(nèi)毒素（<0.1 EU/µg DNA）。

EndoFree Plasmid Kits去除細(xì)菌在裂解過程中釋放的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素會影響原代細(xì)胞和敏感培養(yǎng)細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內(nèi)毒素DNA高度適用于可重復(fù)且結(jié)果可靠的轉(zhuǎn)染。QIAGEN超純無內(nèi)毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應(yīng)用。

質(zhì)粒制備中的內(nèi)毒素水平*

* 宿主菌：大腸桿菌DH5α  質(zhì)粒：pRSVcat.
^† 1 ng LPS = 1.8 EU. 
^‡ 根據(jù)表中數(shù)據(jù)計算 

無內(nèi)毒素DNA配合原代細(xì)胞得到高轉(zhuǎn)染率*

* 原代兔胃壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進行轉(zhuǎn)染。該數(shù)據(jù)是細(xì)胞表達(dá)GFP的百分率，由轉(zhuǎn)染48小時后綠色熒光細(xì)胞數(shù)量確定。轉(zhuǎn)染效率是每種純化方法制備的超過2個不同的DNA中6–9個復(fù)制樣本的平均值。（數(shù)據(jù)由C. Chew and J. Parente友情提供， Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）

原理

純化的質(zhì)粒DNA內(nèi)毒素污染水平取決于所用的純化方法（參見"Endotoxin levels in plasmid preparations"）。硅膠技術(shù)純化的DNA具有非常高的內(nèi)毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內(nèi)毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內(nèi)毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質(zhì)粒DNA。廣州健侖生物科技有限公司

QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊設(shè)計的過濾裝置，用于代替細(xì)菌細(xì)胞堿裂解后的離心步驟。QIAfilter Cartridges可*去除SDS沉淀，清除細(xì)菌裂解液，相比離心可大量節(jié)約時間，減少1小時的質(zhì)粒純化時間。QIAfilter Maxi Cartridges在幾秒鐘內(nèi)，推動液體通過過濾器，以注射的方式將裂解物清除。廣州健侖生物科技有限公司

QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹脂（不提供EndoFree Plasmid Buffer Set）專為核酸純化而開發(fā)。它的分離性能使得DNA純度與連續(xù)兩次CsCl梯度離心獲得的DNA純度相當(dāng)。由重力流驅(qū)動并持續(xù)運轉(zhuǎn)的預(yù)裝QIAGEN-tips，zui大限度減少手動制備質(zhì)粒所需的時間。整個QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用有毒物質(zhì)，如苯酚，氯仿，溴化乙錠和CsCl，zui大限度地減少對用戶和環(huán)境的危害。

內(nèi)毒素，又稱脂多糖或LPS，是革蘭氏陰性菌細(xì)胞膜的組成部分，如大腸桿菌。內(nèi)毒素在質(zhì)粒解裂純化過程中釋放，并顯著地降低內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率。此外，內(nèi)毒素與DNA競爭“自由”轉(zhuǎn)染試劑，影響轉(zhuǎn)染實驗。內(nèi)毒素也誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞等免疫細(xì)胞中非特異性免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染結(jié)果的誤讀。這些反應(yīng)包括誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)和脂類，如IL-1和前列腺素的合成?？傮w而言，內(nèi)毒素在轉(zhuǎn)染實驗裝置中是不可控變量，影響結(jié)果的可重復(fù)性，使它們難以對比、解讀。在基因治療研究中，內(nèi)毒素可造成內(nèi)毒素休克綜合癥和激活補體級聯(lián)，干擾研究。廣州健侖生物科技有限公司 產(chǎn)品咨詢：/

操作流程

在堿性條件下，細(xì)菌細(xì)胞裂解，用QIAfilter Cartridge清除粗裂解物。將Endotoxin Removal Buffer加入到過濾后的裂解液中。冰浴后，將純凈的裂解物上樣到陰離子交換柱上，在適當(dāng)?shù)牡望}和pH條件下，質(zhì)粒DNA選擇性結(jié)合。用中鹽緩沖液清除RNA、蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物和其他低分子量雜質(zhì)，超純質(zhì)粒DNA被高鹽緩沖液洗脫。DNA由異丙醇脫鹽、沉淀并且離心回收。

應(yīng)用

使用EndoFree Plasmid Kits純化的DNA適合多種敏感應(yīng)用，包括：

1.轉(zhuǎn)染，包括原代、敏感以及懸浮細(xì)胞

2.基因治療研究

3.基因沉默 

4.顯微注射

技術(shù)參數(shù)：

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