牛紐布病毒PCR檢測試劑盒說明書 返回列表頁

反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

特點：
高特異性：與其他病毒無交叉反應，無非特異性擴增；
高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100；
操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。

人去唾液酸糖蛋白受體1（ASGPR1）ELISA試劑盒50906-56-4 20mgArteannuin B HPLC≥98% 0.312-20 ng/mL青蒿乙素；B

ENTPD5抗體,兔單抗484-20-8HPLC≥98%A042620mg/支WB   IHC-P   IP  佛手柑內(nèi)酯，香柑內(nèi)酯，5-甲氧基補骨脂素

ELISAKitforHumanATP-dependentRNAhelicaseDDX423952-98-5 20mg Sinigrin  0.78-50 ng/mL黑芥子苷

Pancreasin/Marapsin/PRSS27抗體,兔單抗103548-82-9C16H20N2OHuperzine B≥98%ELISA   石杉堿乙

人α胰蛋白酶抑制劑重鏈H4(ITIH4)ELISA試劑盒383715-23-9 20mg  N-(3-Methoxybenzyl)（9Z,12Z,15Z)-octadeca-9,12,15-trienamide 0.312-20 ng/mLN-氧基芐基-9順-12順-15順-亞麻酸酰胺

苯丙氨酸脫氨酶培養(yǎng)基5g 100Alloxan Momohydrate 四氧嘧啶

伏/附/強力/Iodophor41575-94-4炭疽桿菌檢測用配套試劑41575-94-4 Carboplatin 卡鉑

3%NaCl蔗糖130-02491 20支2-丁

人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI)ELISA試劑盒2 x 10mg 0.156-10 ng/mL紅茶茶黃素標準品試劑盒 BLACK TEA THEAFLAVIN STANDARDS KIT(SH)(PLEASE CALL)

人橫紋肌肉瘤細胞，A-204細胞 20mg HPLC≥98%Isocurcumenol異莪術 24063-71-6用于含量...1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶異莪術

ARIH2抗體,兔多抗,抗原親和純化25MLWB   IHC-P   IF  ICC/IF   三氟化醚絡合物 Boron Trifluoride - Ethyl Ether Complex >98.0%(W)

登革熱病毒通用型(DFV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)10309-37-2 20mgBackuchiol HPLC≥98% 78-5000 pg/mL補骨脂；破故紙

MYB/c-Myb抗體,兔多抗,抗原親和純化 123-42-2 5mL 0.983IHC-P   雙丙

人CD24酶(CD24)ELISA試劑盒26091-79-210mg Byakangelicol 31.2-2000 pg/mL白當歸腦

CarbonicAnhydraseIII/CA3抗體,兔單抗22368-21-4HPLC≥98%A073220mg/支WB   IP   異澤蘭黃素

ELISAKitforHumanHighmobilitygroupproteinB314965-20-95mg 3,6,7-Trimethylquercetagetin 0.312-20 ng/mL3,6,7-*基槲皮萬壽菊素（96%）

牛紐布病毒PCR檢測試劑盒說明書L-Hydroxyproline L-羥基脯氨酸  25g 半固體瓊脂

Nuclear fast red 核固紅  5G TBX培養(yǎng)基

白術內(nèi)酯II;蒼術內(nèi)酯II  HPLC≥98% Atractylenolide II 人胃癌細胞，MKN-45細胞 用于含量測定

絡塞定 10mg  Rosiridin 脫氫表雄(Dehydroepiandrosterone)ELISA試劑盒

5-溴-2'-脫氧尿苷 BROMO-2'-DEOXYURIDINE, 5-(RG)  250mg 人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA試劑盒

順-2-丁-1,4-二 cis-2-Butene-1,4-diol >94.0%(GC)  500G Galectin-3/LGALS3抗體,兔單抗

異夏佛塔苷 C26H28O14 isoschaftoside JAM-A/F11R抗體(FITC),鼠單抗 ≥98%

L-相思豆霉素 ABRINE, L-(RG)  10mg 人cAMP依賴蛋白激酶催化亞基α(PKAC-alpha)ELISA試劑盒