陰溝腸桿菌PCR檢測試劑盒價格 返回列表頁

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。

特點(diǎn)：
高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100；
操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進(jìn)行多個檢測；
高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應(yīng)特點(diǎn)
(1) 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

WORT肉湯100g 250gImidazoie 咪唑

ELISAKitforHuman2'-5'-oligoadenylatesynthase25mg 0.312-20 ng/mLCYANIDIN-3-O-LATHYROSIDE CHLORIDE(SH)

萋-泥氏染色液/Ziehl-NeelsenStrain022-18492細(xì)菌耐酸染色液7787-35-1 錳酸鋇BariumManganate

人抗凝血酶III(ATIII)ELISA試劑盒6 x 10mg 15.6-1000 ng/mL葛藤類黃標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 KUDZU FLAVONOID STANDARDS KIT(P)

GGCT抗體,兔多抗73030-71-4C15H20O3Atractylenolide III≥98%ELISA   白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ

VCL/Vinculin抗體,兔多抗,抗原親和純化6 x 5mgIHC-P   西番蓮標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒 PASSIONFLOWER STANDARDS KIT(P)

ELISAKitforHumanApolipoproteinL116830-15-2 20mgAsiaticoside HPLC≥98% 31.2-2000 pg/mL積雪草苷;亞細(xì)亞皂苷

SerpinA7/TBG抗體,兔多抗,抗原親和純化38748-32-2HPLC≥98%A010420mg/支ELISA   雷公藤素

人補(bǔ)體成分3(C3)ELISA試劑盒55481-88-4 20mg Swertiamarine 3.12-200 U/L大葉茜草素

CD48/SLAMF2/BCM1抗體,兔多抗58558-08-0C42H68O13Saikosaponin B1 HPLC≥98%ELISA   柴胡皂苷B1

ELISAKitforHumanSomatotropin185972610mg  Swertisin 31.2-2000 pg/mL當(dāng)藥黃素

DDR1Kinase/MCK10/CD167抗體,鼠單抗98474-78-3C36H62O10Pseudoginsenoside RT5 HPLC≥98%ELISA   FCM   擬人參皂苷RT5

人胃饑餓素O-?；D(zhuǎn)移酶(GOAT)ELISA試劑盒1g 0.312-20 ng/mL3,4-二羥基苯基丙酸 DIHYDROCAFFEIC ACID(RG)

馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂K-FRUGL 250gD-果糖/D-葡萄糖檢測試劑盒 K-FRUGL

ELISAKitforHumanProenkephalin-A25mg 78-5000 pg/mL阿洛糖 ALLOSE, D-(+)-(RG)

ER培養(yǎng)基/ErikssonMediumASBC3020BR熒光胺

陰溝腸桿菌PCR檢測試劑盒價格假馬齒莧皂苷 II BACOPASIDE II(P)  5mg 人轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白ig-h3(Betaig-h3)ELISA試劑盒

川芎 20mg  Tetramethylpyrazine ELISAKitforHumanCartilageoligomericmatrixprotein

穿心蓮內(nèi)酯 ANDROGRAPHOLIDE(SH)  100mg 人ADP/ATP移位酶1(ADP/ATPtranslocase1)ELISA試劑盒

地塞米松醋酸酯  100mg  0.995 CES3/Carboxylesterase3抗體,兔單抗

人抗菌肽(Att)ELISA試劑盒  96T/48T CHO培養(yǎng)基基礎(chǔ)/CHOMediumBase

紫云英苷；黃芪苷、莰非-3-O-葡萄糖苷、山柰-3-葡萄糖苷、百蕊草素Ⅱ 20mg Astragalin 人C9orf140蛋白(ProteinC9orf140)ELISA試劑盒 HPLC≥98%

2-環(huán)己烷基環(huán)己 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG)  100mg ELISAKitforHumanGalectin-3

D-酸快速檢測試劑盒K-DATE  K-DATE 沙氏葡萄糖瓊脂（含氯霉素）