腸出血性大腸桿菌:血清型PCR檢測試劑盒 返回列表頁

特點：
高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴增；
高靈敏度：檢測靈敏度可達10~100；
操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進行多個檢測；
高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

樣品 DNA 的制備：
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果：
PCR反應(yīng)特點
(1) 特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

ELISAKitforHumanPlacentalprotein13-like500G 0.78-50 ng/mL1-溴-3-硝基苯 1-Bromo-3-nitrobenzene >98.0%(GC)

MBD4抗體,兔多抗,抗原親和純化 958-60-1 100mg 0.999WB   IP   2-丁-2,4-DNPH

人肺腺癌細胞，HCC-78細胞 20mg HPLC≥98%4-[2-(3,5-dihydroxyphenyl)ethenyl]benzene-1,3-diol白藜蘆 29700-22-91 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶白藜蘆

MICA抗體(FITC),鼠單抗5mgFCM   固 ALDOSTERONE(SH)

伯氏疏螺旋體(BB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)476-32-4 20mgChelidonine HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL白屈菜堿

人組織蛋白酶L(Cath-L)ELISA試劑盒88206-46-6 20mg Notopterol 31.2-2000 pg/mL羌活

IL12A&IL12B抗體,兔多抗1787013C24H39NO9Mesaconine≥98%ELISA   新烏頭原堿

ELISAKitforHumanHighmobilitygroupproteinHMG-I/HMG-Y204935-85-35mg 3,7,4'-Trihydroxy-5-methoxy-8-prenylflavanone 0.156-10 ng/mL(2R,3R)-3,7,4'-三羥基-5-氧基-8-異基二氫黃

大鼠胸大動脈平滑肌細胞，A7R5細胞11 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶Fluka標準品廣州代理

錳鹽營養(yǎng)瓊脂/Manganese(II)NutrientAgar7529-22-8用于嗜熱需氧芽孢桿菌的檢驗7529-22-8 4-基嗎啉-N-物-助催化劑

ELISAKitforHumanSphingosine1-phosphatereceptor35mg 0.156-10 ng/mL華蟾素 CINOBUFOTALIN(RG)

大鼠脈絡(luò)膜成纖維細胞 20mg HPLC≥98%Sennoside D用于含量測定5 x 10^5 cells/T25培養(yǎng)瓶番瀉苷D;蕃瀉苷D

人癌胚抗原細胞粘附分子(CEACAM1)ELISA試劑盒481-46-9 20mgGinkgetin HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL銀杏素；白果雙黃，銀杏雙黃，銀杏黃素

EpCAM/TROP-1/TACSTD1抗體,兔多抗,抗原親和純化2586-96-1HPLC≥98%A056220mg/支ELISA   WB   蓮心堿

ELISAKitforHumanEpidermalgrowthfactorreceptor104-55-2 20mg Cinnamaldehyde 78-5000 pg/mL肉桂

CellAdhesionMolecule2/CADM2抗體,兔多抗,抗原親和純化40957-83-3C16H12O5Glycitein≥98%WB   黃豆黃素

腸出血性大腸桿菌:血清型PCR檢測試劑盒說明書巖藻糖//墨角澡糖/L-去氧水解糖  1g 5g 平板計數(shù)瓊脂（PCA）顆粒

6-姜；姜  HPLC≥98% 6-Shogaol 人胚腎細胞，AD-293細胞 用于含量測定

雞豆黃素A 20mg  5,7-Dihydrox -4'-methoxyisoflavone ELISAKitforHumanDesmoglein-3

告達庭 20mg  Caudatin 人巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA試劑盒

β-欖香 C15H24 β-Elemene RBKS抗體,兔多抗 ≥98%

管花苷B C32H40O16 Tubuloside B TGF-beta1/TGFB1抗體,兔多抗,抗原親和純化 HPLC≥98%

1-十六烷/鯨蠟 CETYL ALCOHOL(1-HEXADECANOL)(SG)  10mg 人白三B4受體1(LTB4R)ELISA試劑盒

二氫歐山芹素；二氫山芹 20mg columbianetin 鵝特定基因序列(Goose)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) HPLC≥98%