當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>信號(hào)系列>> AS6321355植酸酶測試盒(比色法)
產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 規(guī)格 | 100管/48樣、50管/24樣 |
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級(jí)別 | 其他 |
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321355 | 植酸酶測試盒(比色法) | 100管/48樣 |
AS6321355 | 植酸酶測試盒(比色法) | 50管/24樣 |
測定意義
植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對環(huán)境的污染,改善營養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。
測定原理
植酸酶在一定溫度和pH值條件下,水解底物植酸鈉生成無機(jī)磷與肌醇衍生物,無機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,在700nm處有特征吸收峰,根據(jù)700nm處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、恒溫水浴鍋,甲苯(不允許快遞)。
試劑的組成和配制
緩沖液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加緩沖液30mL配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
顯色劑:粉劑×6管,4℃避光保存,臨用前根據(jù)用量每瓶加0.4mL雙蒸水溶解,再加1.6mL試劑二混勻。
樣本處理
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。
測定操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本(g) | 0.03 | 0.03 |
甲苯 | 20 | 20 |
振蕩混勻,室溫放置15min | ||
緩沖液(µL) | 500 | |
試劑一(µL) | 500 | |
混勻,37℃孵育24h,10000g,4℃離心5min,取上清 | ||
上清 | 100 | 100 |
顯色劑(µL) | 100 | 100 |
混勻,靜置15min,測定700nm處吸光值,△A=A測定管-A對照管。每個(gè)測定管設(shè)一個(gè)對照管。 |
酶活性計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.8795x + 0.0084,R2 = 0.9977;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為吸光值△A。
酶活性定義:在37℃,pH5.5的條件下,每克土樣每小時(shí)從5mmol/L的植酸鈉溶液中釋放出1μmol的無機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性(μmol/h /g 土樣)=(△A-0.0084)÷0.8795×V反總÷W÷T
=0.82×(△A-0.0084)
V反總:反應(yīng)總體積,0.52mL;T:反應(yīng)時(shí)間,24h;W:樣本質(zhì)量,0.03g。
注意事項(xiàng)
1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,每一瓶是10個(gè)樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過期,應(yīng)放棄使用。
2、ΔA線性范圍為0.01-0.5。
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