Invitrogen 脂質(zhì)體2000 昱都生物*相關(guān)產(chǎn)品如下Invitrogen TRIzol試劑 0.75ML和1.5ML；Invitrogen 17504044 B-27（黃顏色） 10ML；12587010 B-27 （黃顏色）不含維生素A 10ML；17502048 N-2 （粉紅顏色） 5ML。

Invitrogen 脂質(zhì)體2000

我們介紹一下的操作流程、注意事項等。

一、操作流程    
事實上Lipofectamine系列產(chǎn)品操作流程都是又快又簡單：稀釋DNA以及Lipofectamine 2000，混合2種稀釋液保溫20分鐘，加入培養(yǎng)細(xì)胞中孵育24－96小時檢測結(jié)果。下面是Invitrogen提供的詳細(xì)流程和注意事項。
1、轉(zhuǎn)染前一天，胰酶消化細(xì)胞并計數(shù)，細(xì)胞鋪板，使其在轉(zhuǎn)染日密度為90%。細(xì)胞鋪板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養(yǎng)基中。
2、對于每孔細(xì)胞，使用50μl無血清培養(yǎng)基（如OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基）稀釋0.8μg-1.0μg DNA。3、對于每孔細(xì)胞，使用50μl OPTI-MEMⅠ培養(yǎng)基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE 2000試劑。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘（在30分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。保溫時間過長會降低活性。） 注意：即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細(xì)胞也可以使用D-MEM培養(yǎng)。如果D-MEM做為Lipofectamine 2000的稀釋液，必須在5分鐘內(nèi)同稀釋的DNA混合。
4、混合稀釋的DNA（第2步）和稀釋的Lipofectamine 2000（第3步）。在室溫保溫20分鐘。 注意：溶液可能會混濁，但不會影響轉(zhuǎn)染。復(fù)合物可以在室溫保持6小時穩(wěn)定。
5、直接將復(fù)合物加入到每孔中，搖動培養(yǎng)板，輕輕混勻。注意：如果在無血清條件下轉(zhuǎn)染，使用含血清的正常生長培養(yǎng)基進行細(xì)胞鋪板。在加入復(fù)合物前移去生長培養(yǎng)基，替換為0.5ml無血清培養(yǎng)基。
6、在37℃，5％的CO2中保溫24-48小時，無須去掉復(fù)合物或更換培養(yǎng)基或者在4-5小時后更換生長培養(yǎng)基也不會降低轉(zhuǎn)染活性。
7、在細(xì)胞中加入復(fù)合物24-72小時后，分析細(xì)胞抽提物或進行原位細(xì)胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細(xì)胞類型和啟動子活性。對穩(wěn)定表達，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細(xì)胞傳代至新鮮培養(yǎng)基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。
8、對于96孔板培養(yǎng)，不再需要提前一天進行細(xì)胞鋪板，而可以直接在平板中制備復(fù)合物，然后將細(xì)胞懸浮液加入到復(fù)合物就可以了，這樣進一步減少了轉(zhuǎn)染時間。這種改進步驟已經(jīng)過293-H，293-F，COS-7L和CHO細(xì)胞的試驗，同傳統(tǒng)方法相比活性稍低。快捷的步驟和蛋白表達細(xì)胞系的高效轉(zhuǎn)染使得Lipofectamine 2000非常適用于96孔板的高通量轉(zhuǎn)染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。