Rtrypsin 重組胰蛋白酶 返回列表頁(yè)

rTrypsin的應(yīng)用

• 包括干細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞系的細(xì)胞解離和增殖

• 疫苗生產(chǎn)加工

• 在細(xì)胞固定和分選之前分離切割的細(xì)胞•

rTrypsin的優(yōu)點(diǎn)

• 通過(guò)重組生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的胰蛋白酶不受動(dòng)物酶如胰凝乳蛋白酶或羧肽酶的污染。

• 無(wú)動(dòng)物來(lái)源（AOF）生產(chǎn)工藝消除了最終產(chǎn)品中病毒和動(dòng)物相關(guān)污染物的風(fēng)險(xiǎn)

• 允許簡(jiǎn)單替換牛或豬胰蛋白酶

• 穩(wěn)定性不受Ca2+的影響• 穩(wěn)定一致的供應(yīng)

rTrypsin穩(wěn)定性

• rTrypsin是一種顆粒狀產(chǎn)品

• rTrypsin的特殊穩(wěn)定性使得在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中酶的儲(chǔ)存和常規(guī)處理變得容易和方便

rTrypsin專一性rTrypsin像天然胰蛋白酶一樣在賴氨酸和精氨酸的羧基側(cè)切割肽鍵。這代表rTrypsin可以簡(jiǎn)單地替代豬或牛胰蛋白酶rTrypsin 酶特異性在pH 9.0 （Suc-AAPX-pNA）

底物：Suc-AAPA-PNA，Suc-AAPR-PNA，Suc-AAPD-PNA、Suc-AAPIPNA、Suc-aapm-PNA，Suc AAPV-PNA，Suc AAPL-PNA，SucA-APEPNA，SucA-APK-PNA，Suca-AAPF-PNA.

測(cè)定緩沖液：100mM琥珀酸，100mM HEPES，100mM CHES，100mMCABS，1mM CaCl2，150mM KCl，0.01%Triton X-100，pH9.0。

測(cè)定：20μ 重組胰蛋白酶/豬胰蛋白酶（在0.01%Triton X-100中稀釋）與100μl測(cè)定緩沖液在微量滴定板孔中混合。

通過(guò)加入100μl PNA底物（50mg PNA底物溶解在1.0ml DMSO中，并進(jìn)一步用0.01%Triton X-100稀釋45倍）開(kāi)始測(cè)定。監(jiān)測(cè)OD405的增加作為胰蛋白酶/豬胰蛋白酶活性的量度

rTrypsin用于分離細(xì)胞胰蛋白酶可用于來(lái)自粘附于培養(yǎng)容器內(nèi)表面生長(zhǎng)的單層的細(xì)胞。rTrypsin在干細(xì)胞系如IPH和HES以及CHO、Vero和MDCK細(xì)胞系上表現(xiàn)良好。最常見(jiàn)的方法是用胰蛋白酶/EDTA/PBS緩沖液（調(diào)節(jié)至pH 7）處理，將細(xì)胞從培養(yǎng)基質(zhì)中去除。根據(jù)細(xì)胞系的不同，建議的rTrypsin濃度應(yīng)調(diào)節(jié)至0.2 mg/mL（相當(dāng)于200 U/mL活性為1000 USP/mg粉末的rTrypsin），并進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。