Quick Cell TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒

Quick Cell TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（紅色）

產品描述

 DNA斷裂是晚期細胞凋亡的一個特征。DNA在細胞凋亡過程中被激活的內源性核酸內切酶切割成大小不同的片段，并同時產生與切口相同數目的3'-OH末端，末端脫氧核糖核酸轉移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT)能識別并把脫氧核糖核苷酸連接到切口的3'-OH。TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labeling)是一種通過預先標記脫氧核糖核苷酸（dUTP），間接標記DNA切口3'-OH，進而通過觀察熒光反映細胞凋亡情況的檢測方法。

李記生物研發(fā)的主要在兩個方面做了改進：1）在Alexa Fluor的基礎上改進了染料，使熒光更為穩(wěn)定；2）本試劑盒采用不含甲胂酸鈉(sodium cacodylate)的專有緩沖液，確保檢測結果真實反應細胞凋亡情況。幾乎所有的TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒都包含甲胂酸鈉(sodium cacodylate)，這種化合物對細胞有高度毒性，這種高毒性可誘導細胞凋亡，促進DNA降解產生DNA單鏈或雙鏈片段，使細胞凋亡的檢測結果失真。提供了反應所需的全部組份，可用于多功能酶標儀、熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測，可用TRITC通道或設置Ex /Em = 550nm/590-650 nm檢測信號。

試劑盒組成

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃避光保存，保質期12個月。

使用方法（以96孔板為例）

1. 準備

  a. 培養(yǎng)細胞到合適密度。貼壁細胞*密度30000-50000 細胞/孔（96孔板）,懸浮細胞*密度1-2 x 106 細胞/mL。陰性和陽性對照的細胞同時培養(yǎng)或調整到相同  密度，陽性對照根據需要確定是否設置。

  b. 準備試劑：4%甲醛細胞固定液；細胞通透液（0.2% Triton X-100 in PBS選做）；DNA酶 I反應液（選做）

2. 固定細胞增加通透性

  a. 去除培養(yǎng)液，每孔添加100 μL 的4%甲醛固定液，在室溫條件下孵育20-30分鐘，去除固定液。

  b.根據需要選做：添加100μL/孔的細胞通透試劑（0.2% Triton X-100 in PBS. 需自備），在室溫孵育10分鐘。

  c. 用PBS緩沖液沖洗細胞2-3次

  d. 若設置陽性對照，可在TUNEL反應前，在陽性對照樣品中加入DNA酶 I，室溫孵育30分鐘后，與樣品一同進行TUNEL反應。

3. TUNEL反應

  a. 按下表準備反應混合液（多樣品檢測可參考表中數據放大，不同細胞系可摸索建立*反應體系。）

  b. 每孔加入50 μL上一步配好的反應混合液，37℃孵育60分鐘。

  c. 去除反應混合液，每孔用200 μL的PBS緩沖液沖洗細胞3-5次。

4. 觀察熒光信號，可以用熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀在Ex /Em = 550nm/590-650 nm條件下觀測。

5. (選做)用1 X Hoechst(組份C, Ex/Em=350/460nm)染色做成像分析。