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玩轉(zhuǎn)病毒載體生產(chǎn)：Hydrosart超濾膜包的應(yīng)用秘籍
病毒載體被廣泛應(yīng)用于基因治療、疫苗或溶瘤病毒治療癌癥等領(lǐng)域。腺病毒是常用的病毒載體之一，尤其適用于疫苗應(yīng)用。使用懸浮哺乳動物細胞可以高效地生產(chǎn)腺病毒。細胞培養(yǎng)結(jié)束后，需要進行細胞裂解步驟以釋放AAV，同時也會釋放 HCP 和 DNA 等許多雜質(zhì)。在澄清去除細胞碎片后，腺病毒懸浮液需要先進行濃縮和洗濾換液，然后再進行第一步層析純化。正確選擇超濾膜包和超濾(TFF)系統(tǒng)可確保病毒的最高回收率。濃縮和洗濾換液(DF) 階段也有助于產(chǎn)品純化，并方便后續(xù)的下游處理步驟。本文主要介紹超濾濃縮和洗濾換液步驟中，Sartorius的Hydrosart超濾膜包的應(yīng)用數(shù)據(jù)，供大家參考。
原有工藝優(yōu)化案例一
原超濾工藝：300KD聚醚砜材質(zhì)膜包，病毒回收率僅為10%
工藝改進推薦：Hydrosart穩(wěn)定化纖維素膜包
物料類型和測試產(chǎn)品：
測試結(jié)果：
鑒于Hydrosart膜包在其他項目中的良好表現(xiàn)，第一次測試采用300KD的Hydrosart膜包進行測試，過程中未發(fā)生明顯的堵膜情況，濾出通量比較平穩(wěn)，見圖1。病毒產(chǎn)品回收率由原來的10%上升到47.82%，明顯優(yōu)于原有聚醚砜材質(zhì)膜包的回收率。
圖1 Hydrosart 300KD膜包超濾測試-AAV
但是第一次測試回收率并不高，而且在下游透過端檢測到有病毒泄露，因此采用100KD Hydrosart膜包進行了第二次測試，洗濾換液階段濾速平穩(wěn)，見圖2。病毒回收率達到113.22%。
圖2 Hydrosart 100KD膜包超濾測試-AAV
由上面的結(jié)果我們可以得出，Hydrosart 100KD膜包用于澄清后AAV病毒原液超濾濃縮和洗濾換液，可以實現(xiàn)很高的回收率和較高的濾出流速，處理過程中濾速平穩(wěn)，使用后膜包的水通量恢復(fù)率很好。
原有工藝優(yōu)化案例二
原超濾工藝：100KD聚醚砜材質(zhì)中空纖維，濾出速度較低，換液效率低，放大后與系統(tǒng)匹配難度大
工藝改進推薦：100KD Hydrosart穩(wěn)定化纖維素膜包
物料類型和測試產(chǎn)品：
測試結(jié)果：
第一次測試時，洗濾3倍后料液逐漸開始呈現(xiàn)乳白色現(xiàn)象，主要是緩沖液pH較低，在過程中出現(xiàn)雜蛋白沉淀。產(chǎn)生的沉淀堵塞膜包，導(dǎo)致膜包的濾速明顯下降，見圖3。針對該物料，根據(jù)實際情況，與客戶溝通工藝步驟和緩沖液配比，再進行重復(fù)測試，總回收率72.97%。
圖3
捕獲層析后的物料，采用Hydrosart 100KD膜包進行超濾測試，少量濃縮后洗濾6倍，樣品pH和電導(dǎo)達到上樣要求，具體超濾參數(shù)見圖4，產(chǎn)品回收率提高到89.49%。
圖4
Hydrosart是穩(wěn)定化再生纖維素材質(zhì)，材質(zhì)本身具有天然的親水性能，超低吸附；是纖維素經(jīng)過化學(xué)修飾改造而得的膜材，除了保留纖維素本身的親水性外，其化學(xué)兼容性更強。只需常規(guī)的CIP程序(如堿清洗)即可獲得很好的水通量恢復(fù)率，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于多種血清型的AAV超濾生產(chǎn)。
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賽多利斯Hydrosart®超濾膜包
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