卡那霉素酶聯(lián)免疫反應試劑盒 返回列表頁

REAGEN 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應試劑盒

1．概述

REAGEN™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應測試盒是用于細胞裂解液、培養(yǎng)液、質粒等樣本中卡那霉素殘留的定量檢測。該試劑盒有以下特點：

Ø 快速(10-40分鐘)，多種樣品的非有機溶劑的提取方法，高回收率(>80%)。

Ø 高靈敏度（0.2ppb）。

Ø 高重復性。

Ø 快速的ELISA檢測方法（不考慮樣本量的前提下只需不到1小時）。

2.試劑盒原理

REAGEN™ 卡那霉素酶聯(lián)免疫反應測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應原理，抗原已經(jīng)包被于微孔板上。分析時，樣品、酶標物以及抗體加入孔中，如果樣品中含有藥物，會與微孔板上的抗原競爭抗體，同時酶標物與抗體結合。加入TMB底物，底物的顏色顯色強度與樣品中卡那霉素的含量成反比。

3.試劑盒組成

已包被抗原的酶標板(Kanamycin-coated Plate)（可拆式） 1×96孔

標準液(Standards)（0，0.2，0.6，1.8，5.4，16.2ppb） 6×1.0mL

高標液1000ppb（Spiking） 1×1.0mL

一抗(Antibody #1) 1×6.0mL

HRP酶標二抗(HRP-Conjugated Ab#2) 1×6.0mL

10×樣品稀釋液（10×Sample diluent） 1×15mL

20×濃縮洗液(Wash Solution) 1×28mL

TMB底物(TMB Substrate) 1×12mL

終止液(Stop Buffer) 1×12mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過1個月不使用試劑盒，請將標品、一抗和二抗放置-20℃或者冰凍保存。

4.檢測限

5.交叉反應

6.未提供的設備或材料

1) 酶標儀

2) 離心機

3) 漩渦振蕩器

4) 移液器(10、20和100mL，1mL各一支)

5) 多道移液器（50-300mL）

7.注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得最佳實驗效果。

1) 標準品中含有卡那霉素，請小心使用。

2) 不要使用過期的試劑盒。

3) 不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4) 盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱或者蒸發(fā)。同樣的，不

要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5) 水質量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6) 加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7) 孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8) 從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質量的風險。

9) 將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

8.樣品的準備

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內解凍。

準備1×樣品稀釋液:

1體積 10×樣品稀釋液加9體積蒸餾水稀釋。

細胞裂解液/培養(yǎng)液/質粒

（1） 取200mL細胞裂解液等樣本，渦流震蕩混勻30秒；

（2） 4000×g離心5分鐘；

（3） 每孔取50mL上清液來檢測。

稀釋倍數(shù):1

9.檢測步驟

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1) 1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合。

檢測

以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）加入50mL的標準品于所設定的孔中；

（2） 加入50mL的樣品于所設定的孔中；

（3） 按順序在每孔中加入50mL HRP酶標二抗和50mL一抗，輕敲微孔板邊緣混勻30秒；

（4） 室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5） 洗板4次，每次應該加入250mL 1×洗液，最后一次使板盡量甩干并在吸水紙上拍干；

（6） 加入100mL的TMB底物；計時，輕敲微孔板邊緣混勻30秒；

（7） 在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育15分鐘，加入100mL的終止液終止反應；

（8） 在450nm下讀OD值 (讀數(shù)前，最好用無絨布擦拭除去微孔底部的水分和指痕)。

10.結果計算

（1） 分別計算標準、質控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2） 以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3） 從標準曲線上讀取樣品的濃度值（通用計算軟件根據(jù)Log/Log標曲看線性和結果）。

以下曲線圖是卡那霉素酶聯(lián)免疫反應測試盒典型標準曲線

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