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苦參堿常用的方法

   2007年01月31日 14:45  
 苦參、苦參堿注射液及其它制劑,常以苦參堿為含量測定的指標(biāo)??鄥A常用的測定方法有:酸堿滴定法、薄層掃描法 、液相色譜法(HPLC法)、毛細(xì)管電泳法 (HPCE)等,現(xiàn)簡單介紹如下:

    ㈠ 酸堿滴定法:
    1989年烏云木其格等以溴甲酚綠為顯色劑的兩相滴定法測定了掃炎拴中苦參堿的含量,兩相滴定時,有機(jī)相組成為氨仿-異戊醇, 水相pH為3.9。
    1990年胡梅素等:采用酸堿滴定法測定發(fā)欣中苦參堿的含量。
    2002年趙春香等采用提取中和法測定邁清注射液中苦參堿的含量.采用0.O05mol/L的硫酸滴定液和0.Olmol/L的氫氧化鈉滴定液
    2003年王以明等采用兩相滴定法測定苦參片中苦參堿的含量。用NaCl飽和溶液為水相,含苦參堿的CHCl3為有機(jī)相,0.1%鄰氯酚紅為指示劑,在兩相溶液中加入定量的酸標(biāo)準(zhǔn)液,充分振搖后,用標(biāo)準(zhǔn)堿液剩余滴定。
    酸堿滴定法為測定苦參堿zui早使用的方法之一,發(fā)展到兩相滴定法,主要是利用苦參堿在兩相中的溶解度不同來測定,它克服了傳統(tǒng)酸堿滴定法中操作復(fù)雜的特點(diǎn),操作簡單,但誤差較大。當(dāng)用其余方法如HPLC無法分離苦參堿時不失為一種好方法。
    ㈡ 比色法
    1991年,王兆華等采用薄層比色法測定喘咳平氣霧劑中苦參堿的含量。以氯仿-甲醇-氨水(5:0.6:0.2)為展開劑,碘蒸氣顯色。0.2mol/L溴麝香草酚藍(lán)pH7.6的緩沖溶液(0.1mol/L NaH2PO4+0.1mol/L NaOH溶液)6ml、氯仿萃取得到溶液。
    1996年張洪娟等以溴麝香草酚藍(lán)pH7.6的緩沖液為顯色劑,采用萃取后比色的方法測定御診軟膏中苦參堿的含量。
    2004年胡海清等采用酸性染料比色法測定復(fù)方丁香洗劑中丁香酚和苦參堿的含量??鄥A與溴麝香草酚藍(lán)絡(luò)合后于(415±2)nm波長處測定吸收度。
    各種苦參生物堿大都可與溴麝香草酚藍(lán)溶液(pH 7.6)形成離子對,紫外光譜相似,故被測生物堿應(yīng)盡可能與其他生物堿分離*??山?jīng)氧化鋁柱色譜法或其它方法做進(jìn)一步分離,但操作繁瑣。一般若藥理作用相似,此方法可適用于醫(yī)院中藥制劑的質(zhì)量控制。
    ㈢ 紫外分光光度法
    1999年曹志紅等采用薄層層析-紫外分光光度法對益肝丸中的苦參堿進(jìn)行定量研究。紫外-可見分光光度計(日本島津UV-190) 。展開劑為氯仿-甲醇-氨水(5:1:0.1) ,紫外燈365nm下觀察淺黃色熒光帶。
    2001年鄒桂欣等采用薄層-紫外分光光度法測定參歸顆粒中苦參堿的含量。UV-260紫外分光光度什(日本島津),展開劑為氯仿-甲醇-氨水(5:0.6:0.2),10℃ 以下放置的下層溶液;顯色劑為改良碘化鉍鉀溶液。
    2004年丁青龍等采用薄層-紫外分光光度法測定復(fù)方苦參素膠囊中苦參堿的含量。752-紫外分光光度計(上海第三儀器廠),,以氯仿:甲醇:氨水(5:0.6:0.2)的下層溶液為展開劑展開,顯色劑為改良碘化鉍鉀溶液。
    也有資料報道,苦參堿的薄層法測定中使用碘蒸氣顯色。但使用碘蒸氣顯色,顯色時間不易控制,斑點(diǎn)呈色摸糊,顯色之后的碘蒸氣不易揮散干凈,造成測定結(jié)果的重現(xiàn)性較差。一般還是還是    采用2000版藥典所載的碘化鉍鉀溶液顯色,斑點(diǎn)清晰可辯。
    采用薄層層析-紫外分光光度法測定苦參堿的含量對所采用的溴麝香草酚蘭緩沖液的pH要求較高,pH7.6需要用pH計測定,操作較繁瑣。
    ㈣ 薄層掃描法
    2000版《中國藥典》所載方法為薄層掃描法。近幾年常用的是雙波長掃描法,展開系統(tǒng)多為苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨、氯仿-甲醇-氨水這兩種系統(tǒng)?,F(xiàn)簡要介紹幾種。
    鄭曉晴等采用薄層掃描法測定了鼻咽靈片中苦參堿的含量。CS-900O雙波長薄層掃描儀(日本島津)。薄層板為0.4%CMC-Na硅膠G板,展開劑:苯-丙酮-醋酸乙酯-濃氨(2:3:4:0-2),顯色劑:稀碘化鉍鉀試液。雙波長反射法鋸齒掃描,λ1=505 nm,λR=650 nm,SX =3。
    劉云等采用薄層掃描法測定婦樂洗劑中苦參堿的含量CS-930型雙波長薄層掃描儀(日本島津);展開劑:氯仿-甲醇-濃氨水(50:6:2)上行展開l5cm;顯色劑:稀碘化鉍鉀試渣。掃描條件:λs=490nm,λR=600nm,Sx=3,△Y=0.2mm,狹縫1.0×1.0mm。
    江海燕采用雙波長薄層掃描法對不同廣豆根炮制品中苦參堿進(jìn)行測定。展開劑為氯仿-甲醇-濃氨水(46:6:0.2),顯色劑為改良碘化鉍鉀溶液。采用入s=510 rim,λR=650nm雙波長反射鋸齒掃描。
    有文獻(xiàn)報道指出,為排除稀碘化鉍鉀顯色劑對背景的干擾,薄層展開后,應(yīng)在室溫下盡量揮干展開劑中殘留的氨,顯色后立即用干凈的玻板封蓋。薄層掃描法測定苦參堿的含量,雖然結(jié)果較穩(wěn)定,但操作麻煩,不如HPLC等方法簡單,故2005版藥典修訂為液相色譜法(HPLC)。
    ㈤ 液相色譜法
    2005版中所載方法為液相色譜法,色譜條件為:以氨基鍵合硅膠為填充劑;乙腈-無水乙醇-0.3%磷酸溶液(80:10:10)為流動相;檢測波長為220nm。理論板數(shù)按氧化苦參堿峰計算應(yīng)不得低于2000。
    近年來液相色譜法使用頻率zui多,流動相系統(tǒng)除藥典規(guī)定外,常有磷酸二氫鉀-十二烷基磺酸鈉-乙腈、乙腈-硫酸銨-十二烷基硫酸鈉、甲醇-水-三乙胺、磷酸緩沖溶液-三乙胺-乙腈等。色譜柱一般都為ODS、苯基柱色譜柱。檢測波長:205nm、210 nm、219 nm等。儀器:島津LC 10ATVP液相色譜儀(SPD 10AVP檢測器,SPD—M10Avp二極管陣列檢測器,島津色譜工作站。)、Waters液相色譜儀(Waters 510泵;Waters 486紫外檢測器)等。

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