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中藥復(fù)方成分分析研究進(jìn)展

   2006年06月22日 10:20  
在中藥復(fù)方整體的定性(即全部化學(xué)成分)、定量(即復(fù)方間量比關(guān)系)知之甚少的情況下,中藥復(fù)方的化學(xué)成分分析是一項(xiàng)難度極大、極富挑戰(zhàn)的任務(wù)。多年來,中醫(yī)藥學(xué)者不懈努力,建立了眾多中藥復(fù)方化學(xué)成分的分析方法。

  普通化學(xué)分析法

  采用薄層掃描和紫外吸收光譜法比較左金丸及吳萸圓方中黃連主要成分小檗堿的濃度,發(fā)現(xiàn)水煎液中小檗堿溶出率降低,反映了傳統(tǒng)用兩藥配伍多采用丸劑的合理性;采用絡(luò)合滴定法考察清熱瀉火方劑中生石膏與甘草配伍對(duì)鈣鹽煎出率的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者配伍可使硫酸鈣煎出率降低;以單掃描伏安法聯(lián)合氣相色譜-質(zhì)譜法從分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)平衡角度研究復(fù)方枳術(shù)丸組方,發(fā)現(xiàn)了劑量、工藝等因素對(duì)有效成分含量的影響;以液相色譜法測(cè)定不同比例白芍與生甘草配伍后水煎液中葡萄苷、甘草酸的含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與單味白芍水煎液相比,白芍與生甘草以3:2,2:1比例配伍,芍藥苷含量基本無變化,比例為1:1時(shí),芍藥苷含量下降。

  將體外分析方法與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究相結(jié)合,用體外模擬實(shí)驗(yàn)研究的方法,探討麻杏石甘湯劑、散劑及同劑型的單味藥在人工胃液、胃-腸液中的成分,同時(shí)給兔灌胃進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn),以石油醚、氯仿、醋酸乙酯對(duì)胃、胃-腸容物進(jìn)行提取分離,對(duì)其主要成分溶出度含量變化規(guī)律及4種溶劑分步提取的化學(xué)成分、pH變化進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),各部位提取物 的總體化學(xué)成分及主要成分含量的變化規(guī)律與對(duì)照組一致,證實(shí)了體外模擬法在中藥復(fù)方化學(xué)成分研究中的可行性。

  多種分析方法聯(lián)用

  作為液相色譜技術(shù)的補(bǔ)充和發(fā)展,對(duì)于中藥復(fù)方中大量未知組份的定性通常需借助于聯(lián)合技術(shù),包括液相色譜和質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用、液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜(LC-MS-MS)聯(lián)用、毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜(CE-MS)聯(lián) 用、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用、氣相色譜-熒光分光光度(GC-FTIR) 聯(lián)用和液相色譜-紫外分光光度法(LC-UV)聯(lián)用等。以當(dāng)歸補(bǔ)血湯為例,液相色譜統(tǒng)一方法為其突破口,提出了對(duì)中藥復(fù)方從非水反相(異丙醇、 甲醇)到純水反相進(jìn)行系統(tǒng)分離摸索,并對(duì)黃芪中66個(gè)化學(xué)成分、當(dāng)歸中78個(gè)化學(xué)成分和當(dāng)歸補(bǔ)血湯中71個(gè)化學(xué)成分進(jìn)行了液相色譜a,c指數(shù)和紫外光譜的測(cè)定。通過此項(xiàng)研究發(fā)展了復(fù)雜樣品的智能優(yōu)化和峰識(shí)別的方法及軟件,確定了黃芪分離的多階梯多二元流動(dòng)相梯度條件,通過中藥復(fù)方與其單味藥所有化學(xué)成分的比較發(fā)現(xiàn):黃芪與當(dāng)歸有很多共同的化學(xué)成分,但含量不一樣。將當(dāng)歸補(bǔ)血湯與黃芪和當(dāng)歸對(duì)比發(fā)現(xiàn),當(dāng)歸補(bǔ)血湯配伍后沒有主要化學(xué)成分的產(chǎn)生或消失,但有含量上的變化。

  zui近,分子生物學(xué)技術(shù)得到長(zhǎng)足發(fā)展,也為中藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)的分析方法帶來了新的契機(jī)。隨著基因芯片技術(shù)、基因組與蛋白質(zhì)組分析相關(guān)技術(shù)的建立,中藥復(fù)方多組份、多靶點(diǎn)、多途徑作用特點(diǎn)必將與相應(yīng)的基因、蛋白表達(dá)起來,人們通過比較藥物治療前后其各自不同的差異表達(dá)譜,可確定不同配伍組方對(duì)應(yīng)的基因及蛋白表達(dá)靶點(diǎn)。根據(jù)表達(dá)的器官特異性及表達(dá)水平、中藥復(fù)方君臣佐使理論及用藥劑量的關(guān)聯(lián)性、不同配伍組方對(duì)應(yīng)基因及蛋白靶點(diǎn)的相互作用,可分析復(fù)方中各組成、各單味藥之間的密切關(guān)系,從而闡明藥物作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及內(nèi)在配伍規(guī)律。應(yīng)用基因芯片技術(shù)、差異蛋白質(zhì)表達(dá)技術(shù)、多維色譜差異顯示技術(shù)、智能多模式多柱色譜表達(dá)技術(shù)、激光共振電離光譜結(jié)合色譜技術(shù)等分析方法,可從不同角度去研究中藥復(fù)方藥物組份的“黑箱”和方劑體內(nèi)效應(yīng)的“黑箱”,并在此基礎(chǔ)上分析有效復(fù)方的定性、定量特征及其與機(jī)體相應(yīng)酶、受體、基因和蛋白質(zhì)表達(dá)差異的關(guān)系,將有可能發(fā)現(xiàn)治療特定疾病的中藥復(fù)方有效物質(zhì),推動(dòng)中藥新藥的開發(fā)。

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