對照RNA(不含目的基因)同樣處理,產(chǎn)生cDNA為driver,微量的tester和過量的driver在合適的條件下雜交,tester中和driver中相同的基因雜交子就被除去,在tester中*的基因被富集,通過PCR方法擴增出來,得到差減庫,擴增產(chǎn)物可以通過T載體直接克隆和測序分析。在探討兩個相關(guān)組織或兩個關(guān)聯(lián)過程中基因表達差異的情況,通過該方法可以獲得某些基因在某一樣品中表達,而在對應(yīng)的樣品中不表達或表達量很低。
該方法也可以用于基因組特異片段的篩選,差別在于前者用mRNA為實驗材料,后者用基因組DNA或其它可比樣品的DNA為材料,兩者的后半部分實驗內(nèi)容*相同,前者得到的主要是差異表達的基因,后者得到的主要是差異片段。
客戶需提供兩個樣品確實存在顯著差異的證據(jù),并告知打算得到哪個樣品中被上調(diào)或下調(diào)的基因。如果同時想知道上調(diào)和下調(diào)的基因,則相當于兩個服務(wù),價格加倍。
實驗結(jié)束后我們會提供篩選到的含有差異基因的質(zhì)粒,用兩個樣品制備的cDNA制備的探針對篩選到的差異克隆進行Southern鑒定的圖片一幅,以及簡明實驗步驟