Tth DNA 聚合酶

特征

•  Tth DNA 聚合酶是一種熱穩(wěn)定性酶，分子量為 92kDa ，從 Thermus thermophilus HB-8 中分離。

•  在 74℃ 時(shí)可進(jìn)行 DNA 復(fù)制，在 95℃ 的半衰期為 20 分鐘。

•  Tth DNA 聚合酶在鎂離子存在的條件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向發(fā)生聚合反應(yīng)，形成雙鏈 DNA ，也可在鎂離子存在的條件下，以 RNA 為模板沿 5'—3' 方向發(fā)生核苷酸聚合反應(yīng)。

•  該酶也具有 5' － 3' 外切酶活力，無(wú) 3' － 5' 外切酶活力， 可用于實(shí)時(shí)熒光 PCR 。

•  能在較高的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，增加了引物雜交和延伸的特異性；減少了由于 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)引起的問(wèn)題。

•  10× 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)緩沖液： 100mM Tris-HCl (pH 8.3 ， 25℃ ), 900mM KCl ； 10×PCR 反應(yīng)緩沖液： 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ) 和 1 ％ Triton X-100 。

•  無(wú)外源核酸酶和細(xì)菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 檢測(cè)，純度＞ 95% 。

單位定義

在 70℃ 條件下， 30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTP 的摻入反應(yīng)成為 TCA 不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。反應(yīng)條件為： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未標(biāo)記和標(biāo)記 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作為底物。