斑馬魚模型評(píng)價(jià)抗血管內(nèi)皮損傷性血栓作用【評(píng)價(jià)原理】
普納替尼通過影響人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、血管形成等正常功能而造成血管內(nèi)皮損傷，從而引起血管堵塞，發(fā)生血栓。斑馬魚心血管系統(tǒng)在分子信號(hào)通路上與人和哺乳動(dòng)物的同源性達(dá)到85％以上，近年來斑馬魚廣泛地被用于心血管疾病研究領(lǐng)域，如心力衰竭、血栓、心律失常、心肌病、動(dòng)脈粥樣硬化等。
軀干出現(xiàn)血栓后，回心血量便會(huì)減少，血管直徑將會(huì)減小，血流速度降低，經(jīng)過血紅細(xì)胞特異性染色（呈紅色），患有血栓的斑馬魚心臟紅細(xì)胞比正常斑馬魚心臟紅細(xì)胞明顯減少，由于斑馬魚血液系統(tǒng)發(fā)育過程透明的特點(diǎn)，可以明顯被觀察到；利用血管熒光斑馬魚結(jié)合顯微鏡，可以明顯觀察到患有血栓的斑馬魚血管直徑減小；利用血流分析，可明顯觀察到患有血栓的斑馬魚血流速度減慢。
斑馬魚模型評(píng)價(jià)抗血管內(nèi)皮損傷性血栓作用【實(shí)驗(yàn)方案】
我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和服用抗血栓藥物組。其中正常對(duì)照組未攝入普納替尼，模型對(duì)照組與服用抗血栓藥物組都攝入了等量的普納替尼（普納替尼通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內(nèi)）。服用抗血栓藥物組在加入普納替尼的同時(shí)攝入阿司匹林和二十五味珍珠片之類的抗血栓藥物。
服用一段時(shí)間抗血栓藥物后，（1）對(duì)斑馬魚整體做血紅細(xì)胞特異性染色，觀察血栓發(fā)生情況、心臟紅細(xì)胞信號(hào)強(qiáng)度變化；（2）在熒光顯微鏡下分析斑馬魚血管直徑變化；（3）在血流分析下觀察斑馬魚血流速度變化情況。
【結(jié)果展示】
圖1. 斑馬魚心臟紅細(xì)胞表型圖
黃色虛線區(qū)域?yàn)樾呐K，心臟內(nèi)紅色為紅細(xì)胞
可以看到，服用抗血栓藥物組的心臟紅細(xì)胞數(shù)量與模型對(duì)照組比較明顯增多。
圖2. 斑馬魚血管直徑表型圖
可以看到，服用抗血栓藥物組的血管直徑與未攝入普納替尼的正常對(duì)照組比較相似，未出現(xiàn)模型對(duì)照組血管直徑顯著減小的情況。
圖3. 斑馬魚血流速度
與模型對(duì)照組比較，*** p< 0.001
可以看到，服用抗血栓藥物組的血流速度與模型對(duì)照組比較，血流速度顯著加快。
【評(píng)價(jià)結(jié)論】
1.經(jīng)過每組30尾斑馬魚的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，服用抗血栓藥物組的與模型對(duì)照組比較，心臟紅細(xì)胞明顯增多、血管直徑明顯增大、血流速度明顯加快。
2.本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了a司匹林和er十五味珍珠片具有顯著的抗血栓作用。
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