一、簡(jiǎn)介
PCR是聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction)的簡(jiǎn)稱，是在短時(shí)間內(nèi)體外大量擴(kuò)增特定的DNA段的分子生物學(xué)技術(shù)。自動(dòng)完成聚合酶鏈反應(yīng)，提供DNA 擴(kuò)增的溫度條件而設(shè)計(jì)的儀器稱為PCR儀。
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二、 PCR儀溫度校準(zhǔn)的項(xiàng)目及必要性
一個(gè)穩(wěn)定的溫度循環(huán)是成功實(shí)現(xiàn)PCR所必需的。其中溫度控制的動(dòng)、穩(wěn)態(tài)特性是影響PCR擴(kuò)增結(jié)果正確與否的重要因素之一, 這包括溫度準(zhǔn)確性、升降溫速度、溫場(chǎng)均勻性、max超調(diào)溫度。
（一）、溫度準(zhǔn)確性
溫度準(zhǔn)確性是PCR儀重要的性能指標(biāo)，如溫度準(zhǔn)確性低可直接造成非特異性擴(kuò)增，甚至是錯(cuò)誤的擴(kuò)增結(jié)果，造成假陽性和假陰性。
市場(chǎng)上各家廠商考核基因擴(kuò)增儀（PCR儀）性能的主要指標(biāo)，一般廠家的企業(yè)指標(biāo)為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度準(zhǔn)確度為±0.3℃。故需對(duì)PCR儀控溫準(zhǔn)確度進(jìn)行測(cè)試。
校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)平均溫度的計(jì)算公式為：I—參加檢測(cè)的溫度探頭序號(hào)；n—參加檢測(cè)的溫度探頭的數(shù)量
（二）、溫場(chǎng)均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導(dǎo)致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗(yàn)結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標(biāo)。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。
校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過選取孔板中16個(gè)特殊反應(yīng)位置來測(cè)量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個(gè)探頭在同一時(shí)刻max溫度與min 溫度的差值。均勻度計(jì)算公式為：tmax-tmin
（三）、升降溫速率
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量的多少?zèng)Q定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預(yù)設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力（max-升溫速率達(dá)15~20℃）。一個(gè)完整的PCR過程，是由若干個(gè)升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因?yàn)?ldquo;變性”，“退火”和“延伸”3個(gè)階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過程盡可能地迅速，才能縮短每個(gè)PCR循環(huán)以及整個(gè)PCR 過程所需時(shí)間。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。
儀器校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。
（四）、max-超調(diào)溫度
當(dāng)溫度從一定點(diǎn)溫度調(diào)節(jié)到另一定點(diǎn)溫度,就會(huì)產(chǎn)生溫度的超調(diào)。超調(diào)溫度過大同樣會(huì)對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)生影響，所以校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要計(jì)算max-超調(diào)溫度和平均超調(diào)溫度。
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三、解決方案
根據(jù)基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測(cè)溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范溫度校準(zhǔn)系統(tǒng)，依據(jù)<YYT1173-2021聚合酶鏈反應(yīng)分析儀> 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，*符合《JJF 1527-2015 聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范》的要求，我們公司推出了PCRCAL來校準(zhǔn)pcr儀。
具體方案 產(chǎn)品包括ZCPCRCAL-96W、ZCPCRCAL-96S、ZCPCRCAL-48S、ZCPCRCAL-32S。4種型號(hào)，可滿足大多數(shù) 24孔，48孔，96孔的PCR儀的計(jì)量校準(zhǔn)需求。、
系統(tǒng)采用高精度多路測(cè)溫儀，高精度/高靈敏度的熱敏電阻探頭，采用加工工藝，保證探頭與孔間的充分接觸，應(yīng)用專業(yè)的溫度驗(yàn)證系統(tǒng)軟件，實(shí)現(xiàn)校準(zhǔn)自動(dòng)化，自動(dòng)保存原始記錄，自動(dòng)生成校準(zhǔn)報(bào)告。校準(zhǔn)過程中，系統(tǒng)軟件實(shí)時(shí)記錄數(shù)據(jù)，并生成趨勢(shì)圖；系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算校準(zhǔn)結(jié)果所需要的溫度示值誤差、溫度均勻性，升降溫速率等參數(shù)。
為保證系統(tǒng)的測(cè)量精度實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)傳感器溫度的標(biāo)定，可使用PCR儀溫度驗(yàn)證系統(tǒng)軟件 配合我公司提供的ZCTB系列高精度恒溫槽，校準(zhǔn)等溫塊，高精度多路測(cè)溫儀，二等標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)等裝置對(duì)驗(yàn)證探頭進(jìn)行校準(zhǔn)。
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