蛋白質(zhì)磷酸化是生物界 普遍,也是 重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,20世紀(jì)50年代以來一直被生物學(xué)家看作是一種動態(tài)的生物調(diào)節(jié)過程。在細(xì)胞中,大概有1/3的的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是通過磷酸化修飾的。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾與多種生物學(xué)過程密切相關(guān),如DNA損傷修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)等。磷酸化蛋白質(zhì)及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過程的機理,進(jìn)一步認(rèn)識生命活動的本質(zhì)。近年來隨著蛋白質(zhì)組技術(shù)的不斷發(fā)展,蛋白質(zhì)磷酸化的研究越來越受到廣泛的關(guān)注。
磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側(cè)鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質(zhì)磷酸化過程的的工具,因此研究蛋白質(zhì)及多肽的磷酸化反應(yīng)并確定成熟簡便的合成路線就變得非常重要。目前為止,多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化;單體法則是將適當(dāng)保護(hù)的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中,這種方法較后磷酸化法操作更為簡便,已經(jīng)成為多肽磷酸化修飾的主要方法。
單體法修飾時,磷酸化的氨基酸由于側(cè)鏈修飾的較大基團(tuán)產(chǎn)生的位阻而導(dǎo)致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會比較困難,尤其在含有多個磷酸化位點修飾時,合成將變得異常困難,并且 終產(chǎn)物成分復(fù)雜,難以分離,產(chǎn)率極低。因此,當(dāng)肽鏈中多個位點進(jìn)行磷酸化時,可以考慮采用后磷酸化法,其合成過程主要就是在多肽合成結(jié)束之后,選擇性的脫去要標(biāo)記氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基,對于Tyr,Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng)。側(cè)鏈保護(hù)基在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化時,可以采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,然后在過氧酸條件下氧化生成磷?;?,完成反應(yīng)。我們提供多肽進(jìn)行兩個,三個,四個,五個磷酸化位點修飾的高質(zhì)量多肽。擁有成熟的合成純化技術(shù),不斷進(jìn)取的精英團(tuán)隊,合生生工已經(jīng)成為值得信賴的多肽供應(yīng)品牌。